基因分析技术简介专家讲座.pptx

陶慧卿基因分析技术介绍基因分析技术简介专家讲座第1页

在生物、医学、农牧业领域应用基因分析技术简介专家讲座第2页

测序应用基因组DNA测序cDNA测序未知序列测序已知序列再测序基因分析技术简介专家讲座第3页

双脱氧链终止法原理Sanger双脱氧链终止法最大特点是引入了双脱氧核苷三磷酸（2ˊ,3ˊ-ddNTP）作为链终止剂。ddNTP能够在DNA聚合酶作用下和多核苷酸链3ˊ羟基形成磷酸二酯键，但却不能再与下一个核苷酸缩合，结果使得多核苷酸链延伸终止。基因分析技术简介专家讲座第4页

双脱氧链终止法测序主要步骤扩增待测DNA片段，使其变性，取得单链DNA模板。选择一条与DNA单链互补短链引物，将引物用放射性同位素标识。引物先同单链模板复性。在四个反应管中分别加入待测DNA单链模板、互补引物分子、四种dNTP、DNA聚合酶(Klenow酶)以及不一样ddNTP进行聚合反应。基因分析技术简介专家讲座第5页

基因分析技术简介专家讲座第6页

双脱氧链终止法测序与PCR区分?测序只用一条引物，PCR需要两条引物?测序产物线性增加，PCR产物指数增加?测序需要dNTP和ddNTP，PCR只用dNTP?测序产物是一系列长度相差一个碱基片段，PCR产物只有一条带基因分析技术简介专家讲座第7页

1、商品化测序试剂盒-荧光染料标识ABIPRISMBigDyev3.1和v1.1试剂盒2、自动化测序仪ABIPRISM310、3100和3730全自动遗传分析仪双脱氧链终止法发展基因分析技术简介专家讲座第8页

BigDyev3.1试剂盒反应体系及条件反应体系：单链DNA模板引物DNA聚合酶Mg2+4种dNTP(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)4种不一样荧光标识ddNTP(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)循环条件：96℃1min→(96℃10s→50℃5s→60℃4min)×25个循环→4℃保温基因分析技术简介专家讲座第9页

基因分析技术简介专家讲座第10页

ABIPrism310GeneticAnalyzercapillarySyringewithpolymersolutionAutosamplertrayOutletbuffer+Injectionelectrode-Inletbuffer基因分析技术简介专家讲座第11页

AutosamplerTraySampleVialsElectrodeCapillarySeeTechnologysectionformoreinformationonCE电进样及电泳基因分析技术简介专家讲座第12页

荧光激发和检测基因分析技术简介专家讲座第13页

影响测序质量原因测序成功前提：PCR本身是成功PCR产物一定要经过纯化后再测序测序引物比PCR引物靠后一些(Nestedprimers)在测序反应过程中反应体积不要有波动（蒸发）选择适当测序产物纯化方法基因分析技术简介专家讲座第14页

SNP筛查单核苷酸多态(SNP)是基因组中最为丰富遗传多态，是决定个体差异最主要遗传基础。多态形式主要包含单碱基替换、插入或缺失，普通也包含微小片断插入/缺失。因为很多SNP位点本身就是功效多态位点，使得SNP在疾病易感基因相关性研究中有着广泛应用。基因分析技术简介专家讲座第15页

SNaPshot?MultiplexSystem基因分析技术简介专家讲座第16页

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SNaPshot试剂盒反应体系及条件反应体系：单链DNA模板引物DNA聚合酶Mg2+4种不一样荧光标识ddNTP循环条件：(96℃10sec→50℃5sec→60℃30sec)×25循环→4℃保温基因分析技术简介专家讲座第18页

方法特点分型准确：该技术也称小测序技术，其准确度仅亚于直接测序。多位点同时检测：能够同时检测达12个位点，而Taqman一次仅能检测一个。不受样本量限制:而Taqman对少许样本不适合。基因分析技术简介专家讲座第19页

注意事项1．同一反应管中，不一样位点引物长度必须不一样，最好能相差4-6个碱基。2．引物与模板互补部分（有效引物）Tm值最少要50℃。3．为了改变引物长度，区分不一样位点，能够在引物5’端加poly(dT)、poly(dA)、poly(dC)或者poly(dGACT)尾巴。这四种尾巴理论上不轻易形成二