生防芽孢杆菌与化学杀菌剂混配对香蕉枯萎病菌的.doc

生防芽孢杆菌与化学杀菌剂混配对香蕉枯萎病菌的

室内毒力测定

刘磊梁昌聪杨腊英薛玉潇郭立佳王国芬黄俊生*

(中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室，海南海口571101)

基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项“由尖孢镰刀菌引起的作物土传病害研究”(200903049)资助。

作者简介：刘磊，男，1981年生，研究实习员，研究方向为植物病理学。E-mail：liu2003.1-al@163.com。

*通讯作者：黄俊生，男，广东潮阳人，研究员，博士，研究方向为分子植物病理学。

摘要香蕉枯萎病是毁灭性土传病害，引入生物防治技术可有效降低目前化学杀菌剂的用量，保护生态环境和人类健康。通过平板抑菌试验，研究了2株香蕉枯萎病生防芽孢杆菌C10-1和A5-6对尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxyporumf.sp.cubense)的平板抑制效果以及对化学杀菌剂的适应性，在此基础上，将生防芽胞杆菌与杀菌剂复配，进一步研究其对枯萎病菌的室内抑制效果。结果表明，C10-1菌株对病原菌的抑制效果和对杀菌剂的适应性均优于A5-6菌株，与0.1mg/L咪鲜胺复配后，其抑菌效果显著增强，可达94.96%。

关键词生防芽孢杆菌杀菌剂混配香蕉枯萎病菌毒力

香蕉枯萎病最早于十九世纪末期在巴拿马发生，是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxyporumf.sp.cubense)引起的毁灭性病害，到20世纪50年代，除了南太平洋、地中海、马来西亚等一些岛屿以外，世界其他地方均有该种病害发生，在我国广东、广西、台湾、福建、海南等地也已有该病害发生[1-3]。香蕉枯萎病为系统性病害，病原菌主要通过根系侵入，并向植株输导组织扩展，危害维管束，蔓延速度快，防治难度大[4]。

国内外学者一直致力于防治香蕉枯萎病化学药剂的筛选，目前抗病品种和化学药剂均未取得理想效果，同时化学农药的长期不合理使用反而造成了农药残毒、抗药性和环境污染等诸多问题[5-10]。近年来随着分子生物学技术、基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程、发酵工程等新技术的飞速发展，生物农药产生了巨大的社会效益和经济效益，表现出良好的应用前景，生物防治逐渐成为各国研究香蕉枯萎病防治的热点[11]。本课题在已分离到香蕉枯萎病生防芽孢杆菌的基础上，研究了2株香蕉枯萎病生防芽孢杆菌C10-1和A5-6对尖孢镰刀菌的平板抑制效果以及对化学杀菌剂的适应性，在此基础上，进一步研究两者复配对枯萎病菌的室内抑制效果，以期为生物防治与化学防治相结合防控香蕉枯萎病提供技术支持[12]。

1材料与方法

1.1材料

供试菌株：生防枯草芽孢杆菌菌株C10-1和A5-6，尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种B2菌株，均由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所微生物农药资源课题组筛选或分离保存。

供试药剂：咪鲜胺原药（95%，广州易合通农化供应链有限公司），多菌灵原药（95%，南京艾森精细化工有限公司）。

供试培养基：酵母浸膏液体培养基（NB），马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。

1.2方法

1.2.1生防芽孢杆菌对病原菌的抑制作用

根据联合国粮农组织（FAO）推荐的菌落直径法来测定生防芽孢杆菌对香蕉枯萎病菌的抑制率。将芽孢杆菌C10-1和A5-6活化，转摇瓶（NB）28℃下120r/min振荡培养48h，根据预试验结果，分别配制含C10-1和A5-6稀释菌液的PDA平板，菌液浓度分别为104cfu/mL、105cfu/mL、106cfu/mL、107cfu/mL、108cfu/mL。用直径为0.6cm的打孔器在培养7天的B2菌株平板（PDA)菌落边缘打取菌饼，置于含菌液的PDA平板中央，在28℃下培养7天，待对照菌落将要长满平板时，用十字交叉法测量菌落直径，得到平均值，计算不同浓度药剂对菌落生长的抑制率，计算公式如式(1)。运用Finney几率值分析法对浓度-抑制率进行分析，以浓度的自然对数值为自变量（x），抑菌率的几率值为因变量（y）建立回归方程，得到有效抑制中浓度EC50值。每个处理均设3个重复，以普通PDA平板的菌落作为对照。

对照菌落直径平均数(cm)-处理菌落直径平均数(cm)

抑制率（%）=×100%（1）

对照菌落直径平均数(cm)-菌饼直径(cm)

1.2.2化学杀菌剂毒力测定

根据预试验结果，分别配制含咪鲜胺、多菌灵的NA平板，有效成分终浓度分别为0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L