分解纤维素的微生物专家讲座.pptx

森林生态系统1、生态系统成份？2、分解者作用？3、土壤中分解尿素细菌怎样分离？4、枯枝落叶成份？回顾：分解纤维素的微生物专家讲座第1页

土壤中能水解纤维素微生物分解纤维素的微生物专家讲座第2页

1、纤维素在生物圈分布情况？2、纤维素酶组成及作用？一个复合酶，包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶回顾：纤维素和纤维素酶纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶、CX酶葡萄糖苷酶分解纤维素的微生物专家讲座第3页

能够溶解纤维素粘细菌1能够溶解纤维素粘细菌2分解纤维素的微生物专家讲座第4页

选择培养1、配方是液体培养基还是固体培养基？为何？2、此培养基对微生物是否有选择作用？假如有，是怎样选择？3、你能否设计一个对照试验，说明选择培养基作用？用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照选择培养基配方：纤维素粉5gNaNO31gNa2HPO4﹒7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4﹒7H2O0.5gKCl0.5g酵母膏0.5g水解酪素0.5g将上述物质水解后，用蒸馏水定容到1000ml有。碳源是纤维素，所以能分解纤维素微生物能够大量繁殖。以纤维素作为唯一碳源分解纤维素的微生物专家讲座第5页

利用纤维素刚果红培养基筛选菌种原理是：1、刚果红能够跟大分子多糖牢靠结合。2、纤维素是大分子多糖，跟刚果红牢靠结合。3、纤维素酶降解平板中纤维素成小分子糖，刚果红无法与小分子糖结合，就被洗脱下来，展现透明圈。分解纤维素的微生物专家讲座第6页

刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红思索：这两种方法各有哪些优点与不足方法一缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这么显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌作用方法二优点是操作简便，不存在菌落混杂问题缺点一是因为培养基中还含有淀粉类物质，能够使能产生淀粉酶微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物含有降解色素能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成显著透明圈，与纤维素分解菌不易区分分解纤维素的微生物专家讲座第7页

土壤中纤维素分解菌分离土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到判别纤维素分解菌培养基上挑选产生透明圈菌落分解纤维素的微生物专家讲座第8页

①分布环境（1）土壤取样：富含纤维素环境中操作步骤因为生物与环境相互依存关系，在富含纤维素环境中，纤维素分解菌含量相对提升，所以从这种土样中取得目标微生物几率要高于普通环境。②原因分解纤维素的微生物专家讲座第9页

③实例：树林中多年落叶形成腐殖土，多年积累枯枝败叶等。④讨论:假如找不到适当环境，能够将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存适宜环境。普通应将滤纸埋于深约10cm左右土壤中。分解纤维素的微生物专家讲座第10页

（2）选择培养①目标：增加纤维素分解菌浓度，以确保能够从样品中分离所需要微生物②操作：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培养基变混浊。吸收一定培养液（约5mL），转移至另一瓶新鲜选择培养基中，以一样方法培养到培养液变浑浊。（3）梯度稀释：（4）涂布培养分解纤维素的微生物专家讲座第11页

1、刚果红染色法:（5）筛选菌株：惯用刚果红染色法有两种，一个是先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应，另一个是在倒平板时就加入刚果红试验结果试验组：对照组：经刚果红染色法，菌落周围将会出现显著透明圈不含纤维素培养基经刚果红染色法，菌落周围不出现显著透明圈分解纤维素的微生物专家讲座第12页

讨论：这两种方法各有哪些优点与不足？方法一是传统方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这么显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌作用。方法二优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是因为纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，能够使能够产生淀粉酶微生物出现假阳性反应，但这种只产生淀粉酶微生物产生透明圈较为含糊，因为培养基中纤维素占主要地位，所以能够与纤维素酶产生透明圈相区分。方法二另一缺点是：有些微生物含有降解色素能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成显著透明圈，与纤维素分解菌不易区分。分解纤维素的微生物专家讲座第13页

在产生显著透明圈菌落，挑取并接种到纤维素分解菌选择培养基上，在300C－370C培养，可取得纯培养。2、挑菌分解纤维素的微生物专家讲座第14页

加入青霉素培养基：加入高浓度食盐培养基