生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座.pptx

生物进化过程中微生物形成完善代谢调整机制不会有代谢产物积累解除或突破微生物代谢调整控制目标产物积累微生物育种目标方法：突变、体内重组体外重组（基因工程）4、工业微生物育种生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第1页

4.1从自然界中取得新菌种微生物资源分布土壤、水、空气、动植物及其腐败残骸都是微生物主要栖居和生长繁殖场所分离微生物新种步骤采样、增殖、纯化和性能测定等步骤。生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第2页

经典微生物采样和筛选方法生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第3页

直接从自然界分离得到菌株为野生型菌株。往往低产甚至不产所需产物，只有经过深入人工改造才能真正用于工业生产菌种选育突变、体内重组体外重组（基因工程）生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第4页

4.2诱变育种化学诱变物理诱变紫外线5-溴尿密啶4.2.1紫外线诱变造成DNA链断裂，或使DNA分子内或分子之间发生交联反应机理生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第5页

交联是由二聚体引发，二聚体能够在同一条链相邻碱基之间产生，也能够是在二条链碱基之间形成。研究比较清楚引发DNA复制错误嘧啶比嘌呤对紫外线敏感得多胸腺嘧啶二聚体生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第6页

嘧啶紫外线光化产物生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第7页

诱变过程中需要注意光复活作用微生物等生物细胞内存在光复活酶光复活酶识别胸腺嘧啶二聚体，并与之结合形成复合物打开二聚体，将DNA复原。可见光光能（300-500nm）激活光复活酶此时光复活酶没有活性生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第8页

PRE为光复活酶生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第9页

暗修复细胞内还存在另一个修复体系，它不需要光激活可修复由紫外线、γ射线和烷化剂等对DNA造成损伤。暗修复体系有四种酶参加反应。生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第10页

核酸内切酶切开二聚体5’末端,形成3’-OH和5’-P单链缺口核酸外切酶从5’-P到3’-OH方向切除二聚体，并扩大缺口DNA聚合酶以另一条互补链为模板，从原有链上暴露3’-OH端起合成缺失片段连接酶将新合成链3’-OH与原链5’-P相连接生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第11页

紫外诱变特点方便、诱变效果很好惯用诱变剂在红光下操作或暗培养参数：紫外灯功率、工作距离、照射时间生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第12页

4.2.25-溴尿嘧啶诱变——碱基类似物机理：与碱基结构类似，在DNA复制时，它们能够被错误地掺入DNA，引发诱变效应酮式5-BU结构与胸腺嘧啶相同，与A配对5-BU很轻易进行酮式与烯醇式结构互变异构烯醇式5-BU不与A而与G配对A：T?G：C参数：浓度、时间、缓冲液生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第13页

诱变育种基本过程以下：在诱变处理前，普通应预先做诱变剂用量对菌体死亡数量致死曲线，选择适当处理剂量。适当诱变剂量选择生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第14页

出发菌株选择一是考虑出发菌株是否含有特定生产性状能力或潜力，即菌株是否含有产生特定代谢产物催化酶系基因。自然界直接分离到野生型菌株经历过生产条件考验菌株已经历屡次育种处理菌株菌株起源其次是出发菌株最好已具备一些有利性状，如生长速度快、营养要求低和产孢子早而多菌株。生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第15页

制备菌悬液待处理菌悬液应考虑微生物生理状态、悬液均一性和环境条件。普通要求菌体处于对数生长久，并采取一定办法促使细胞处于同时生长。悬液均一性可确保诱变剂与每个细胞机会均等并充分地接触，防止出现不纯菌落，给后续筛选工作造成困难。用玻璃珠振荡打散细胞团，再用脱脂棉花或滤纸过滤，得到分散菌体。产孢子或芽孢微生物最好采取其孢子或芽孢生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第16页

菌悬液细胞浓度普通控制为：真菌孢子或酵母细胞106?107个/ml，放线菌或细菌108个/ml。菌悬液普通用生理盐水（0.85%NaCl）稀释。诱变处理在诱变处理前，普通应预先做诱变剂用量对菌体死亡数量致死曲线，选择适当处理剂量。适当诱变剂量选择就普通微生物而言，突变率随剂量增大而增高，但到达一定剂量后，再加大剂量反而会使突变率下降。致死率在70%-80%生物进化过程中微生物形成完善代谢调节机制专家讲座第17页

诱变育种中还经常采取诱变剂复合处理，使它们产生协同效应。生物进化过程中微生