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真菌细胞和发酵方法

真菌细胞和发酵方法

本发明提供了能够产生一种或更多种生物质降解酶并且表

现出编码PtaB样蛋白之多核苷酸的表达或拷贝数提高或降

低的分离的真菌细胞。还提供了用于产生一种或更多种生物

质降解酶的发酵方法，其包括表现出编码PtaB样蛋白之多

核苷酸的表达或拷贝数提高或降低的真菌细胞。由本发明的

分离的真菌细胞和发酵方法所产生的生物质降解酶可用于

从生物质产生可溶性糖的方法。

【专利说明】真菌细胞和发酵方法

[0001]本申请要求2011年12月14日提交的美国临时专利

申请N0.61/570,545的优先权,其内容在此通过引用全文并

入本文。

【技术领域】

[0002]本发明涉及用于产生生物质降解酶的真菌细胞和发

酵方法。

【背景技术】

[0003]丝状真菌用于产生用于多种工业生物技术应用的酶

和蛋白。在用于产生酶的真菌中，里氏木霉(Trichoderma

reesei)(红褐肉座菌(Hypocreajecorina)的无性型

(asexualanamorph))的菌株特别突出，原因在于它们分泌大

量(50g/L)可用于工业发酵之酶的能力。不同的团队已经开

发出了不同的高产率(和“超产的(hyperpiOductive)”)木

霉属(Trichoderma)菌株系，几乎都来源于QM6a,其为“野生

型”环境菌株(Bailey和Nevalainen,1981,Enzyme

Microb.Technol.3:153;Vitikainen等，2010,BMC

Genomicsll:441，以及其中的参考文献)。报道的高产率菌

株的实例包括QM9414(Mandels和Andreotti，1978,Process

Biochemistryl3:6)，Rut_C30(Eveleigh和

Montenecourt,1979,Adv.App1.Microbiol.25:57)，

CL847(Durand等，1988，EnzymeMicrob.Technol.10:341)

和M2C38(美国专利N0.6，015，703)。高产率菌株用于表达

生物体的内源性酶以及异源性表达和分泌的蛋白质。这样的

酶和蛋白包括纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、漆

酶(Iaccase)和酯酶——所有这些均已经被表达用于商业目

的。仍在继续努力以鉴定调节蛋白质产率的因素，从而可以

作出进一步改进(LeCrom等，2009，

P.N.A.S.USA106:16151)。

[0004]高产率取决于多种因素。根据特定的菌株，碳源和给

料速率(feedrate)将确定何种分泌酶的基因被诱导和/或抑

制，以及所观察到的生长和酶产生速率。碳源通过转录因子

及其在特定给料条件下被激活或抑制的同源启动子来发挥

作用。蛋白质的表达通常由主要纤维素酶和半纤维素酶的启

动子(例如，Cel6A,Cel7A,XynlIB)或其杂合体(例如Cel7A

和XynllB启动子区域和分泌信号的杂合体(美国专利N0.6，

015，703))来启动。调节这些启动子的转录因子已经部分地

被鉴定和表征。一旦启动转录和翻译，分泌依赖于特定的信

号序列和细胞的分泌机构(secretionapparatus),这两者均

被操控以提高生产率。可以操控从碳源到分泌的所有步骤以

通过鉴定和改变调节蛋白和控制功能级联的网络来提闻生

广率。

[0005]通过选择碳源可以部分地控制纤维素酶和半纤维素

酶的表达(Ι?πι?η等，1997,

Appl.Environ.Microbiol.63:1298；Mach和

Zeilinger,2003,

Appl.Microbiol.Biotechnol.60:515;Schmoll和Kubicek,

2003,ActaMicrobiologica