植物细胞悬浮培养及次生代谢产物生产.pptxVIP

;1983年，日本三井石油化学工业企业在世界上首次成功地采取紫草细胞培养工业化生产紫草宁。;北京锦绣大地农业股份有限企业/index.html;1植物次生代谢产物概述

2细胞初代培养

3高产细胞系筛选

4植物细胞悬浮培养方法

5植物次生代谢物质生产

;1.1植物代谢产物

（1）初生代谢：为维持植物正常生长发育所必须代谢。初生代谢过程中形成各种产物为初生代谢产物。初生代谢产物不稳定，在体内轻易发生转化。

（2）次生代谢：建立在初生代谢基础上，对于植物正常生长发育非必需代谢，其代谢产物为次生代谢产物，次生代谢产物是末端代谢产物，比较稳定，能够在体内积累。;类别次生代谢产物用途

黄酮银杏黄酮，大豆黄酮治疗心血管疾病

醌紫草宁抗菌、抗炎、抗病毒、止血

简单酚类香豆素香料，抗菌消炎

萜类紫杉醇抗癌

青蒿素抗疟疾

生物碱长春新碱抗癌

奎宁抗疟疾;长春碱：＄2million/kg

长春新碱：＄15million/kg;

李时珍在《本草纲目》中所开列1892种药品绝大多数是植物药品，当前仍有约25％法定药品来自植物。其药品有效成份均为次生产物。天然次生代谢产物已经超出2万种。

次生代谢产物应用：色素、香料、药品、添加剂、工业原料等。;;紫杉醇：二萜类化合物

最早由太平洋红豆杉Taxusbrevifolia树皮中分离

广泛用于治疗卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等十几个癌症

当前主要起源于红豆杉属植物;市场需求;药源问题;人工栽培

采取种子繁殖、扦插等无性繁殖方法快速、大面积人工繁育红豆杉幼苗

寻找红豆衫替换物

从红豆杉非树皮部位提取

产紫杉醇非红豆杉植物

;药源问题处理方法（二）;药源问题处理方法（三）;1.2取得植物次生代谢产物方法;;细胞培养是生产次生代谢产物理想路径：

①缩短周期，提升生产效率

植物细胞培养生产周期为15-30d；而完整植株生长短则???个月，长则多年，如木瓜8个月，而紫草为5年

②易于管理，减轻劳动强度

③培养在无菌条件下进行，可排除病虫害干扰

④可探索新合成路线，取得新有用物质

;1.3植物细胞悬浮培养：即是将植物细胞或小细胞团在液体培养基中进行大规模培养技术。;成功悬浮细胞培养体系必须满足3个条件：

分散性良好，细胞团较小，普通在30～50个细胞以下，在实际培养中极少有完全由单细胞组成植物细胞悬浮系。

细胞分裂快，均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳乳白或淡黄色。

有效成份含量高。;植物细胞培养含有周期长、细胞抗剪切能力弱、易聚团等特点。

植物细胞培养反应器设计不但要考虑有利于细胞生长，还要考虑有利于产物积累和分离。

适合植物细胞培养反应器应含有适宜氧传递、良好流动性和较低剪切力。;2细胞初始培养

试验中取得适宜于悬浮培养细胞系过程称为细胞初始培养。

2.1建立悬浮系;搅拌培养；旋转振荡培养；旋转培养

;2.2建立良好悬浮系关键步骤

1.选择适宜外植体

双子叶植物：幼胚、成熟胚、下胚轴、叶片

单子叶植物：幼胚、成熟胚、幼穗、花药等

;2.诱导疏松愈伤组织；

培养基

愈伤组织异质性；

继代培养

3.选择适宜培养基；

基本培养基+CTK/AUX+天然复合物

eg:SH+NAA3.0+BA1.0+CM/YE

培养基PH

;李忠光，龚明..7

;4.悬浮培养早期控制

转速，光，温度

5.悬浮细胞继代与选择

继代中搜集小细胞团

条件培养基：新鲜培养基

;3高产细胞系筛选(P113)

3.1高产细胞系

筛选整体思绪;高产细胞系建立

高产细胞株系特点

培养细胞在遗传上