层析和膜技术在生物制药中的应用.pptx

层析和膜技术在生物制药中的应用层析和膜技术在生物制药中的应用第1页

一.离子交换层析技术定义：利用溶液中各种带电颗粒与离子交换剂之间结协力差异进行物质分离操作称离子交换法。离子交换剂由惰性不溶性载体，功效基团和平衡离子组成。平衡离子带正电荷为阳离子交换剂，平衡离子带负电荷为阴离子交换剂，可见离子交换剂是一类含有活性基团荷电固相颗粒。层析和膜技术在生物制药中的应用第2页

离子交换层析技术离子交换反应：离子交换剂与交换离子间作用是由静电引力而产生，是一个可逆反应过程，当这个反应到达动态平衡时，其平衡点伴随pH、温度、溶剂组成及交换剂本身性质改变而改变。比如，向平衡体系中加入过量X+离子，反应倾向于生成R-SO3-X+。层析和膜技术在生物制药中的应用第3页

离子交换层析技术因为待分离溶质分子带有不一样性质电荷和不一样电荷量，因而在作为固定相离子交换剂和流动相洗脱液之间发生可逆交换作用，并经过调整pH值、或改变同性离子浓度等方法，使溶质分子移动速度发生改变，从而到达分离目标。层析和膜技术在生物制药中的应用第4页

离子交换层析应用如庆大霉素，小诺霉素提炼，应用了离子交换技术。层析和膜技术在生物制药中的应用第5页

庆大霉素提炼酸化目标在于将庆大霉素从菌丝体中释放出来，然后为了便于离子交换，将酸化液中和，再于中性溶液中投入732强酸性阳离子树脂。因为庆大霉素属于碱性抗生素，系有机碱，能与各种酸成盐，在水溶液中以离子状态G+存在，能够为阳离子树脂所吸附，对吸附了庆大霉素732树脂进行洗涤，先用稀酸洗至无Ca2+、Mg2+，接着用无盐水洗至无Cl-，然后用稀氨洗去小组分杂质，最终用浓氨进行洗脱，洗脱液（解吸液）用711阴离子树脂进行脱色，然后经浓缩，转盐、活性炭脱色，喷雾干燥即得庆大霉素成品。?层析和膜技术在生物制药中的应用第6页

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离子交换层析应用粗卵蛋白分级分离卵蛋白中：主要有卵清蛋白54-57%（pI4.5)；蓝清蛋白12-15%（pI6.1)；卵粘蛋白3-4%(pI4.7)。卵白过滤，用polybuffer74稀释，离心，上PBE94柱，以0.025mol/L咪唑-HCl(pH7.2)平衡，用1:10polybuffer74洗脱，分辨率良好。层析和膜技术在生物制药中的应用第8页

二.凝胶层析凝胶层析，是指样品混合物经过一定孔经凝胶固定相，因为流经体积差异，使不一样分子量组分得以分离一个分离技术。因整个层析过程与过滤相同也称凝胶过滤。又因为物质在分离过程中阻滞减速现象，也称排阻层析。或称凝胶扩散层析。凝胶每个颗粒细微结构如同一个筛子，小分子能够进入凝胶网孔，大分子被排阻于凝胶颗粒之外，因而也称分子筛层析。层析和膜技术在生物制药中的应用第9页

凝胶层析分离原理分子筛理论最轻易了解，当含有大小分子混合物品流给凝胶层析柱时，各组分随洗脱液流动而移动.大分子进入不了颗粒内部，最先流出；中分子个别地进入颗粒，流出速度中等；小分子进入全部颗粒内部，移动速度慢，最终流出。整个样品接分子量大小次序先后流出层析柱，从而到达分离。层析和膜技术在生物制药中的应用第10页

凝胶层析分离原理层析和膜技术在生物制药中的应用第11页

凝胶层析分离原理当将含有三种不一样分子量物质混合样品用某种规格凝胶柱进行分离，然后以洗脱体积为横坐标，各物质浓度为纵座标，即得下列图洗脱曲线。层析和膜技术在生物制药中的应用第12页

凝胶层析应用凝胶层析目标（或称分离形式）普通有二种：分组分离和分级分离。分组分离亦称类分离，其目标是将分子量极为悬殊两类物质分开，如蛋白质与盐分离,常见SephadexG-25，因为其分离范围是1,000-5,000，被分离两组物质分子量恰好落在分离范围两侧，大分子组为全排阻，而小分子组为全渗透，其Kd值差可达最大值1。层析和膜技术在生物制药中的应用第13页

凝胶层析应用分级分离，将分子量相差不很大大分子物质加以分离，如分离血清球蛋白与白蛋白。对于这种分子量相近物质分离经常选取排阻限略大于样品中最高分子量凝胶，即O≤Kd≤1。假如样品中含有3个组分话，最好一个靠近全排阻，另一个靠近全渗透，第三个为个别渗透，且分子量大于渗透限3倍，并小于排阻限1/3。层析和膜技术在生物制药中的应用第14页

凝胶层析应用脱盐浓缩去热原分子量测定纯化层析和膜技术在生物制药中的应用第15页

凝胶层析应用:脱盐和浓缩脱盐和浓缩属类分离，选择凝胶使大分子组为全排阻，小分子组为全渗透（Kd=1）。脱盐用凝胶多用大粒度、高交联度凝胶。∵交联度大，凝胶颗粒强度很好；粒度大，柱层操作比较便利，流速也高。洗脱多为易挥发盐缓冲溶液；∵用水洗脱时，有些蛋白质脱盐后溶解度下降，造成被凝胶粒