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第一章绪论
一、生物技术药物分为哪些类型?
1.应用重组DNA技术制造的多肽、蛋白质类
2.基因药物
3.来自动物、植物和微生物的天然生物药物
4.合成与部分合成的生物药物
二、生物技术药物的特性
1.分子结构复杂
2.具有种属特异性
3.治疗针对性强,疗效高
4.稳定性差
5.基因稳定性
6.免疫原性
7.体内的半衰期短
8.受体效应
9.多效应和网络性效应
10.检验的特殊性
三、生物技术制药的特征是什么?
1.高技术
2.高投入
3.长周期
4.高风险
5.高收益
第二章基因工程制药
一、基因工程技术生产药品的优点有哪些?
1.利用基因工程技术可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和
多肽,为临床使用提供有效的保障。
2.可以提供足够数量的生理活性物质,以便对其生理、生化和结构
进行深入的研究,从而扩大这些物质的应用范围。
3.利用基因工程技术可以发现和挖掘更多的内源性生理活性物质。
4.利用基因工程和蛋白质工程对生理活性物质进行修饰和改造,提
高药效价值。
5.利用基因工程技术可以获得新型化合物,扩大药物筛选来源。
二、基因工程药物制造的主要程序有哪些?
分离目的基因,目的基因与载体连接构建DNA重组体,将DNA
重组体转入宿主菌构建工程菌,工程菌发酵,目的基因表达产物的分
离纯化,产品的检验
三、利用基因工程生产蛋白质或多肽首先需要得到其基因,制备目
的基因常用的方法有哪些?
目的基因来源于原核细胞,可选用合适的限制性核酸内切酶切下目的
基因。
目的基因来源于真核细胞,常用的方法有:
1.反转录法:为了克隆编码某种特异蛋白质多肽的DNA序列,可以
从产生该蛋白质的真核细胞中提取mRNA,以其为模板,在反转录酶
的作用下,反转录生成该蛋白质mRNA互补DNA(cDNA第一链),
再以cDNA第一链为模板,在反转录酶或DNA聚合酶Ⅰ作用下,最
终合成编码该多肽的双链DNA序列。
2.反转录PCR:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作
为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA第
一链(不需要合成cDNA第二链),再以cDNA第一链为模板进行PCR
扩增,而获得目的基因或检测基因表达。
3.化学合成法
四、利用逆转录法获得目的基因的基本过程
1.mRNA的纯化
从表达目的基因的细胞中提取总RNA,用寡聚脱氧胸苷(dT)纤维素柱
从总RNA中提取纯化mRNA。
2.cDNA的合成
以mRNA为模板,利用逆转录酶合成cDNA第一链,再用DNA聚
合酶合成cDNA的双链。
3.cDNA克隆
利用合适的连接方法,将产生的双链cDNA片段插入到合适的载体
中。
4.构建cDNA文库
将cDNA于载体连接的重组体转入大肠杆菌中,产生的克隆群体为
cDNA文库。
5.从cDNA文库中筛选目的基因
得到cDNA文库后,通常采用核酸探针杂交法和免疫反应鉴定法从数
以万计的DNA片段中筛选出目的基因。
五、宿主菌的选择
目的基因获得后,必须在合适的宿主菌中表达,才能获得目的
产物。宿主菌应满足以下要求:
1.具有高浓度、高产量、高产率;
2.能利用易得廉价原料;
3.不致病、不产生内毒素;
4.发热量低,需氧低,适当的发酵温度和细胞形态;
5.容易进行代谢调控;
6.容易进行重组DNA技术;
7.产物容易提取纯化。
基因表达的宿主细胞分为两大类,第一类是原核细胞,常用的
有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌等;第二类为真核细胞,常用的
有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。
六、真核基因在原核细胞中表达所用的表达载体必须具备哪些条
件?
1.载体能够独立的复制;
2.具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记,且克隆位点应在启动子
序列后,以便
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