用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌及其微生物菌剂的制作方法.pdfVIP

用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌及其微生物菌剂的

制作方法

专利名称：用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽孢杆菌及其微生

物菌剂的制作方法

技术领域：

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种用于防治黄瓜霜

霉病的摩加夫芽孢杆菌和含有该摩加夫芽孢杆菌的微生物

菌剂，以及它们在防治黄瓜霜霉病上的用途。

背景技术：

黄瓜霜霉病是由古巴假霜霉菌(Pseudoperonospora

cubensisRostow)引起的侵染性气传病害，给黄瓜生产带来

巨大威胁。防治黄瓜霜霉病的方法主要有抗病育种、化学防

治和生态防治(如高温闷棚等)等。由于黄瓜霜霉病为多基因

控制的数量性状遗传，抗病育种难以进行且抗性容易丧失；

化学防治存在容易产生抗药性和对人、环境污染的问题；

而生态防治的高温闷棚需要黄瓜苗龄、长势和天气情况都合

适的条件下才能进行，应用受条件限制。近年来，生物防治

方法由于具有对人、畜安全，对环境没有污染，且对防治对

象的针对性强，效果好、成本低等优点，已成为防治黄瓜霜

霉病的重要途径。生物防治黄瓜霜霉病的方法包括利用植物

提取物、植物的抗病性诱导和生防菌防治等。已报道的用于

防治黄瓜霜霉病的植物提取物近10余种，但是植物提取物

的提取过程繁琐、生产成本高，人工合成单一物质使用后病

原菌容易产生抗药性缺点，使该方法难以应用。利用生防菌

防治黄瓜霜霉病已报道有枯草芽孢杆菌ZH-8液体制剂(张淑

梅等.生物技术.2004(4))和非致病性镰刀菌F047和

F047B10(杨猛等.西北农林科技大学学报(自然科学版)；

2005年05期)。芽孢杆菌(Bacillus)具有分布广、易分离培

养、能产生抗逆性较强的芽孢、贮藏期长和使用方便等特点，

是一种理想的生防微生物，相比其他类型的生防因子，更有

利于菌剂的生产，剂型加工，在环境中存活、定殖与繁殖。

因此，筛选对病原菌具有抑制作用的芽孢杆菌是防治有关植

物病害的最有效方法之一。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于防治黄瓜霜霉病的摩加夫芽

孢杆菌菌株，该菌株具有高效、广谱杀菌活性等优点。本发

明第二目的在于提供一种微生物菌剂。本发明第三目的在于

提供上述微生物菌剂的制备方法。本发明第四目的在于提供

上述摩加夫芽孢杆菌菌株在防治黄瓜霜霉病上的用途。本发

明第五目的在于提供上述微生物菌剂在防治黄瓜霜霉病上

的用途。本发明通过以下技术方案实现一种摩加夫芽抱杆菌

(Bacillusmojavensis)菌株HMB20199,已于2011年12月

20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中

心，保藏编号为CGMCCNo.5617。利用上述摩加夫芽孢杆菌

HMB20199生产的微生物菌剂，其活性成分为摩加夫芽孢杆菌

HMB20199菌体和它的胞外代谢产物。上述微生物菌剂可以为

液体制剂。

上述微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤菌种活化，种子

液制备和发酵培养。上述微生物菌剂的制备方法，具体包括

如下步骤(I)菌种活化将低温保存的HMB20199菌株在LB平

板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上30°C培

养2436小时，得活化的菌株；(2)种子液制备用无菌的接种

环刮取一环步骤(I)活化的菌株接种到IOOmLLB液体培养基

中，在2634°C、、摇床转速为170210rpm的条件下培养22

25小时，得种子液；(3)发酵培养按照体积比为O.5%3.O

%的比例将步骤⑵的种子液接入到蔗糖豆饼粉培养基(PH值为

5.86.2)中，在温度为2834°C、摇床转速为170210rpm

的条件下发酵培养3654h，得发酵液；所述的蔗糖豆饼粉培

养基，其组成成分及其重量百分比为:蔗糖2.O3.0%，豆

饼粉I.62.4%，NaClO.IO.2%，CaCO3O.IO.3%，

KH2PO4O.01O.03%和MgSO4·7H20O.01O.03%，其余

为水；(4)检测发酵液中菌体和芽孢数量，待发酵液中成熟

芽孢占到芽孢和菌体总数的90%时，停止发酵培养；所得即

为HMB20199菌株的液体制剂。上述制备方法步骤(2)和(3)

中所述的温度优选