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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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一、试验目标
经过小白鼠骨髓细胞染色体制备,初
步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体
方法
2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动
物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞,从这些分裂细胞
中,可观察处处于分裂中期染色体,能对一个动物染色体
形态特征、数目进行准确观察和分析。
因为小鼠四肢骨内骨髓细胞中造血干细胞是生成各种
血细胞原始细胞,含有高度分裂能力,本试验采取这一
材料,经过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染
色体标本,可观察到许多处于分裂中期染色体,能够进行
染色体组型分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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首先,为了取得较多中期分裂相骨髓细胞,必须给动
物注射一定剂量秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺锤丝
形成含有破坏作用,当动物被注射适量秋水仙素后,处于
分裂增殖中骨髓细胞因为纺锤丝不能形成,中期染色体不
能正常趋向两极,因而大量细胞处于观察染色体形态最正确
分裂中期。其次,为了能够清楚观察染色体形态,取
出骨髓细胞要经过低渗(KCl溶液)处理使细胞膨胀、染色
体适当分散。固定(甲醇:冰醋酸)使染色体保持完好形
态。染色(Giemsa液)使染色体易分辨、观察。
二、试验原理(continued)
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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1.材料:小白鼠
2.试剂:0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾
(KCl),Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa染
液,0.01M磷酸缓冲液(pH6.8),2%柠檬酸钠。
3.器材:离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊
子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻
片和盖玻片、染色缸、玻片盒
三、试验用具
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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6.离心:1200rpm离心5分钟后弃去上清液,
7.固定:加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀,室温下静
置20分钟,每10分钟时吹打一次。
8.离心:1200rpm离心6分钟,弃上清液。
9.离心:加1.5mL固定液,吸管吹打成细胞悬液。
10.滴片:用吸管吸收细胞悬液,滴在预冷载玻
片上,室温晾干
11.染色:10%Giemsa染液染色30分钟
四、试验步骤(continued)
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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在显微镜下观察Giemsa染色之后染色体
片(染色体呈紫红色),找出分散适度中期染色
体图象,观察小白鼠染色体形态,统计其染色
体数目。
制得好标本应是细胞多、颜色为紫红色。
此时间期细胞因为低渗和固定处理,细胞膜和质
已被去掉,镜下看到仅为膨胀后呈圆形细胞
核。分裂期细胞染色体集中在一起,其外也无细
胞膜包裹,染色体之间无重合,易分辨,臂长
度适中。但最主要是分裂相要多。
五、试验结果
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称
染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙
26
中央、亚中央着丝粒染色体
中央着丝粒染色体,介于6~7号
中央着丝粒染色体,介于8~9号
小白鼠
40
全部为近端着丝粒染色体
大小介于5~6号
大小介于19~20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒染色体
近端着丝粒染色体,介于4~5号
近端着丝粒染色体,介于18~19号
家兔
44
中央、亚中央近端着丝粒染色体
亚中央着丝粒染色体,介于5~6号
近端着丝粒染色体,介于19~20号
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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六、注意事项
低渗与离心等步骤操作要轻。
观察细胞标准为:
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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