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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

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一、试验目标

经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初

步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体

方法

2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动

物染色体数目及特点

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二、试验原理

骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞

中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体

形态特征、数目进行准确观察和分析。

因为小鼠四肢骨内骨髓细胞中造血干细胞是生成各种

血细胞原始细胞，含有高度分裂能力，本试验采取这一

材料，经过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染

色体标本，可观察到许多处于分裂中期染色体，能够进行

染色体组型分析。

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首先,为了取得较多中期分裂相骨髓细胞,必须给动

物注射一定剂量秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺锤丝

形成含有破坏作用，当动物被注射适量秋水仙素后,处于

分裂增殖中骨髓细胞因为纺锤丝不能形成,中期染色体不

能正常趋向两极,因而大量细胞处于观察染色体形态最正确

分裂中期。其次,为了能够清楚观察染色体形态，取

出骨髓细胞要经过低渗(KCl溶液)处理使细胞膨胀、染色

体适当分散。固定(甲醇:冰醋酸)使染色体保持完好形

态。染色(Giemsa液)使染色体易分辨、观察。

二、试验原理(continued)

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1.材料：小白鼠

2.试剂：0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾

(KCl),Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa染

液，0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)，2%柠檬酸钠。

3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊

子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻

片和盖玻片、染色缸、玻片盒

三、试验用具

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四、试验步骤

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6.离心：1200rpm离心5分钟后弃去上清液，

7.固定：加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀，室温下静

置20分钟，每10分钟时吹打一次。

8.离心：1200rpm离心6分钟，弃上清液。

9.离心：加1.5mL固定液，吸管吹打成细胞悬液。

10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻

片上，室温晾干

11.染色：10%Giemsa染液染色30分钟

四、试验步骤(continued)

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在显微镜下观察Giemsa染色之后染色体

片(染色体呈紫红色)，找出分散适度中期染色

体图象,观察小白鼠染色体形态，统计其染色

体数目。

制得好标本应是细胞多、颜色为紫红色。

此时间期细胞因为低渗和固定处理，细胞膜和质

已被去掉，镜下看到仅为膨胀后呈圆形细胞

核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细

胞膜包裹，染色体之间无重合，易分辨，臂长

度适中。但最主要是分裂相要多。

五、试验结果

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几个动物染色体形态特征

动物名称

染色体数

染色体类型

x染色体形态

y染色体形态

青蛙

26

中央、亚中央着丝粒染色体

中央着丝粒染色体，介于6～7号

中央着丝粒染色体，介于8～9号

小白鼠

40

全部为近端着丝粒染色体

大小介于5～6号

大小介于19～20号

大白鼠

42

中央、亚中央近端着丝粒染色体

近端着丝粒染色体，介于4～5号

近端着丝粒染色体，介于18～19号

家兔

44

中央、亚中央近端着丝粒染色体

亚中央着丝粒染色体，介于5～6号

近端着丝粒染色体，介于19～20号

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六、注意事项

低渗与离心等步骤操作要轻。

观察细胞标准为：

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