生物学实验细胞专家讲座.pptxVIP

基础生物学试验三;试验一

普通光学显微镜结构和使用;【试验目标】

了解普通光学显微镜结构及原理，熟练掌握其操作方法；

了解人血与蛙血细胞形态差异。;【试验原理】

显微镜种类：

显微镜组成系统：光学、机械、电子。

普通光镜光学系统：物镜、目镜、聚光器、光阑等。

普通光镜机械系统：镜筒、镜臂、物镜转换器、调焦螺旋（粗调和细调）、载物台、镜座等;【试验步骤】

A：显微镜使用

取用显微镜时，右手握镜臂，左手托镜座，防止倾斜；

接通电源，打开光圈，上升聚光器；

标本片置于载物台上，材料对准通光孔；

低倍下调焦；

选择适当区域推到中央，换高倍镜调焦（细调）；

观察绘图；

结束时将显微镜复原到非工作状态。;显微镜使用注意点：

禁止单手提拿显微镜和随意拆卸零部件；

低倍下调焦时先上升载物台（或下降镜筒），再迟缓下降载物台或上升??筒，使物镜镜头与玻片距离由小到大调焦。普通直接转换成高倍镜后细调焦距；

观察标本时两眼同时睁开；

调整适当光圈和电流强度可使成像更清楚；

假如使用100×油镜，应在标本上滴一滴香柏油，使镜头底端与该介质接触。观察完后及时用二甲苯擦拭油镜头。注意其它镜头不得接触香柏油。;【试验步骤】

B：操作练习：血细胞涂片观察

材料：人血和蛙血涂片

观察内容：血细胞组成；两种红细胞形态差异等。

附：字母装片，精液涂片。

【作业】

绘图：人血和蛙血细胞形态;试验二

动物细胞基本形态与显微测量;【试验目标】

掌握光镜下各种细胞形态和结构特征；

掌握显微测微尺使用和测量细胞大小方法。;【试验原理】

动物各种不一样组织细胞含有不一样形态大小等特征;单层柱状上皮与复层扁平上皮;骨骼肌细胞与心肌细胞;平滑肌细胞

;神经元

肝细胞;【试验原理】;【试验步骤】

A.分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较判别细胞形态结构，核形态数量和位置等特征。

B.蛙血细胞大小测量

1.蛙血涂片制备

2.目镜测微尺标定

3.细胞大小测量;【作业】

1.绘图：各种细胞形态结构

2.统计5个以上蛙血细胞长、短径，得到平均细胞大小;试验三

细胞器显示与观察;【试验目标】

了解光镜下细胞器形态和分布

掌握超活染色法制作光镜标本基本方法;【试验原理】

活体染色是能使活细胞或组织着色且无毒害一个染色方法。可用于硕士活状态下细胞形态结构和生理或病理改变。

活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。活体染色分为体内活染和体外活染（超活染色）。

詹纳斯绿B是毒性较小碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是因为线粒体内细胞色素氧化酶系作用，使JGB保持氧化状态，呈亮绿色；而周围细胞质中染料被还原为无色色基。;【试验步骤】

人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察

用牙签刮取口腔颊部粘膜上皮细胞，在洁净载玻片上与1dJGB染液混匀，染色15min以上。盖上盖玻片，光镜下观察线粒体形态和分布。

B.小鼠肝脏细胞线粒体超活染色与观察

取小鼠肝脏边缘较簿组织，置于含Ringer液平皿中挤压洗涤2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染色30min，Ringer液洗涤1次后转移至载玻片，将组织拉碎，去稍大组织块，盖上盖玻片，镜检。

C.高尔基复合体标本观察

兔脊神经节切片

D.动物细胞中心体标本观察;【作业】

绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体）

小鼠肝细胞（显示线粒体）

兔脊神经节细胞（显示高尔基体）

;试验四

细胞膜通透性;【试验目标】

掌握细胞膜选择通透性和细胞内外水分子交换原理。;【试验原理】

细胞与周围环境之间可进行选择性物质交换。水分子通常以简单扩散方式经过细胞膜，假如细胞内外存在渗透压差时，水分子表现从渗透压低一侧向高一侧扩散。将红细胞置于低渗溶液中，溶剂很快进入细胞内，发生溶血，释放出血红蛋白，重新封闭红细胞膜组成血影。而在高渗溶液中，动物细胞发生脱水皱缩。

将红细胞置于数种等渗溶液中，因为红细胞膜对各种溶质通透性不一样，有不能经过，能经过溶质经过速度也有差异。伴随溶质进入，红细胞内渗透压提升，带动水分摄入，最终引发溶血。经过溶血时间测定可预计红细胞膜对各种溶质通透性大小。;;【试验步骤】

1、制备10％兔红细胞悬液：兔心脏抽血，加肝素抗凝，加等渗氯化钠稀释10×成不透明悬液。

2、在1支试管加5ml蒸馏水，再加0.5ml10％红细胞悬液，观察溶血现象发生。

3、10支试管分别加5ml不一样等渗溶液，再加0.5ml10％红细胞悬液，观察溶血现象是否发生，统计溶血发生时间。

4、显微镜下观察红细胞血影。;等渗溶液;植物细胞骨架光学显微镜观察;【试验目标】

掌握考马斯亮蓝法检测细胞骨架方法;【试验原理】

A.