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试验次序:先做后讲,因为中间需要等候2小时
分组方案:2人制备λ噬菌体裂解液
2人涂受体菌平板和点加λ噬菌体;五、试验步骤
(一)噬菌体裂解液制备(制备λdgal+);;试验七、细菌不足转导;JoshuaLederberg(1925-)
1958年获诺贝尔奖;鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)
两种营养缺点型;基本培养基;;LA22菌株上清液;(三)转导类型;;细菌染色体;噬菌体
由外壳蛋白和DNA组成
基因组DNA全长48.5kb
最少有61个基因
头部包装上限为51kb;5’GGGCGGCGACCT;A;插入宿主菌基因组原噬菌体随宿主菌分裂而增殖,当受到紫外线照射或温度改变时能够造成阻遏物失活,使裂解相关基因表示,噬菌体DNA环出、复制、转录、翻译、包装,细菌裂解,释放出数百个新噬菌体;;;E.coliK12(λ)gal+是一个双重溶源菌;三、试验材料
供体菌:E.coliK12(λ)gal+
受体菌:E.coliK12Sgal-
四、试验器具和药品
1.器具:培养皿,试管,离心管,接种棒,移液器
2.培养基:LB液体培养基,2×LB液体培养基,半乳糖EMB培养基。(配制方法见《遗传学试验指导》)
3、试剂:磷酸缓冲液(PB)、氯仿;五、试验步骤
(一)噬菌体裂解液制备(制备λdgal+);3000rpm;;试验材料
供体菌(gal+,用于制裂解液,分发,1管/组)
半乳糖EMB平板(超净台内,2块/组)
灭菌空培养皿(超净台内,1个/组)
灭菌离心管(超净台内,2支/组)
受体菌(gal-,用于涂EMB平板,超净台内,公用)
PB(磷酸缓冲液,超净台内,公用)
2×LB(超净台内,公用)
氯仿(超净台内,公用)
仪器设备
离心机(201室右侧,公用)
培养箱(206室右侧,公用);;作业:
完成试验汇报
图示λ噬菌体转移半乳糖发酵基因过程
在点滴法细菌转导试验中,设置裂解液对照圈意义是什么?;E.coliK12Sgal-;遗传学实验细菌转导专家讲座
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