高效液相色谱法测定北柴胡不同部位柴胡皂苷a、c、d的含量[权威资料].docVIP

高效液相色谱法测定北柴胡不同部位柴胡皂苷a、c、d的含量

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【摘要】目的探讨高效液相色谱(HPLC)法测定北柴胡不同部位柴胡皂苷a、c、d含量的价值。方法采用高效液相色谱分析仪，在25?柱温、1.0mL/min流速、210nm波长及以等比的乙腈和水作为流动相的条件下，测定北柴胡的侧根、主根和皮部三个部位的皂苷a、c、d的含量。结果北柴胡侧根的柴胡皂苷含量最高，明显高于皮部和主根的皂苷含量(P0.01);皮部的皂苷含量明显高于主根的皂苷含量(P0.01)。在三种柴胡皂苷中以柴胡皂苷c的含量最高。结论北柴胡柴胡皂苷以侧根的含量最高，北柴胡含侧根越多，药材质量越佳。

【关键词】高效液相色谱法;北柴胡;柴胡皂苷;a、c、d含量

柴胡是常用中药，其主要的功效是保肝解热等，主要的药理活性成分是柴胡皂苷。在柴胡皂苷中最主要的3种柴胡皂苷分别是柴胡皂苷a，柴胡皂苷c和柴胡皂苷d。北柴胡以根部入药，是柴胡主要品种之一。本文采用HPLC技术对北柴胡不同部位柴胡皂苷a、c、d含量进行了测定，现报告如下。

1仪器与试药

1.1仪器日本岛津公司的高效液相色谱仪(LC-10Atvp)，配套的SPD-10Atvp紫外检测器;KQ-500DE超声波仪(由昆山市超声仪器有限公司生产);SHZ-IIID型循环水真空泵(由上海亚荣生化仪器厂生产)。

1.2试药柴胡皂苷a、c、d的标准对照品(由上海医药工业研究院提供);甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)以及氨水(分析纯);北柴胡原药材(由广州药材公司提供，批号。

2方法与结果

2.1色谱条件采用C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相:乙腈:水是(50:50)，检测波长:210nm;流速是1.0ml/min。柱温:室温。进样量:20μl。

2.2对照品溶液的制备分别取柴胡皂苷a、c、d的标准对照品适量，精密称定，置容量瓶中加入乙醇制成分别含柴胡皂苷a、c、d的对照品溶液浓度依次为0.502mg/ml、0.404mg/ml、0.412mg/ml备用。

2.3供试品溶液的制备取柴胡原植物药材的根部切碎成粉末状，取根部的不同部位分别是侧根、主根和皮部，将其研碎后过40目筛。各精密称量2g于50ml的量瓶中，加入5%的氨水-乙醇溶液，作为提取剂，先润湿药材表面后在定容至刻度，静置1h。然后采用超声提取1h。得到回流冷凝液后，在使用正丁醇提取3次，将其静止后，在取上清液，再次过滤离心取上清液10ml。挥干溶剂后，加入甲醇将残留渣进行复溶，定容至2ml的容量瓶中。再将样品用0.45μm的滤膜过滤，即可测定。

2.4线性关系考察取柴胡皂苷a、c、d的标准对照品各5mg置于5ml的容量瓶中，用0.5ml甲醇溶解后稀释分别至1、2、4、6、8、10ml刻度。滤过0.45μm的微孔滤膜后分别进样。进样量为20μl。以相色谱的峰面积为纵坐标(Y)、对照品的浓度为横坐标(X)绘制标准曲线，进行回归分析处理，得到的线性方程。柴胡皂苷a、c、d的回归线性方程为Y=3.23×105X+3.92×105

(r=0.9971)对照品的浓度为2μg?ml-1;线性范围为0.53μg-9.8μg。Y=3.10×105X-8.25×105(r=0.9998)对照品的浓度为4μg;线性范围为0.16μg-8.9μg。Y=3.77×105X+4.12×105(r=0.9978)对照品的浓度为6μg，线性范围为0.34μg-11.0μg。

2.5精密度实验分别吸取柴胡皂苷a、c、d的标准对照液20μl进样，分别各重复进样5次，记录峰面积，相对应的RSD值分别为1.3%、1.6%、1.2%。说明该含量测定系统的精密度良好。

2.6稳定性实验取供试品溶液(侧根)分别在1、2、4、8、12、16、24h重复进行测定，记录峰面积，得到3种皂苷的RSD分别是3.9%、4.1%、4.6%，说明供试液在24h内测定结果稳定。

2.7重复性实验取同一批药材(侧根)样品3份，每份0.5g按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定含量，柴胡皂苷a、c、d的RSD分别是2.2%、1.4%、1.9%。

2.8回收率实验取已知三个部位的柴胡皂苷a、c、d粗粉约0.5g，每个部位为3份，并对每份加入标准溶液各1ml，各进样3次。得到三个部位的柴胡皂苷a、c、d的加样回收率。侧根的回收率为92.9%(RSD=2.4%)，93.2%(RSD=3.15%)和93.3%(RSD=2.11%);主根的回收率分别是91.2%(RSD=1.22%)，91.6%(RSD=1.63%)和92.2%(RSD=2.42%)。皮部的回收