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MiR-133bERK反馈环路在甲基苯丙胺神经毒性中的作用及机制研究中期报告

本研究旨在探究miR-133b-ERK反馈环路在甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)神经毒性中的作用机制。本报告为中期报告，主要介绍实验设计、方法和初步结果。

实验设计：

1.建立MA注射小鼠模型，分别在24小时、48小时和72小时后采集小鼠海马组织，提取总RNA。

2.通过qRT-PCR检测miR-133b和ERKmRNA的表达水平。

3.对miR-133b进行上调或下调实验，观察其对小鼠海马神经元生长和突触连接的影响。

4.利用Westernblot检测ERK信号通路相关蛋白的表达水平，包括ERK、p-ERK、Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase3等。

5.利用TUNEL染色观察小鼠海马细胞凋亡情况。

初步结果：

1.使用MA建立小鼠模型，成功模拟MA对中枢神经系统的毒性作用。

2.经过qRT-PCR检测，发现MA处理后miR-133b的表达水平降低，ERK的表达水平升高。

3.通过上调和下调miR-133b实验观察到，miR-133b下调可促进小鼠海马神经元生长和突触连接，上调则相反。

4.经过Westernblot检测，MA处理后ERK信号通路相关蛋白Bcl-2表达水平下降，Bax和Cleaved-caspase3表达水平上升，与细胞凋亡有关。

5.TUNEL染色结果表明，MA处理后小鼠海马细胞凋亡率升高。

结论：

miR-133b-ERK反馈环路可能在MA神经毒性中发挥了重要的作用，其下调可促进神经元生长和突触连接，上调则使其减弱。此外，ERK信号通路的激活与MA引起的小鼠海马细胞凋亡有关。