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重组人促红素注射液（CHO细胞）
ChongzuRenCuhongsuZhusheye(CHOXibao)
RecombinantHumanErythropoietinInjection(CHOCell)
本品系由高效表达人红细胞生成素（简称人促红素）基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，经细胞
培育、分离和高度纯化后制成。含适宜稳固剂，不含防腐剂和抗生素。
1大体要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
工程细胞
2.1.1名称及来源
-
重组人促红素工程细胞系由带有人促红素基因的重组质粒转染的CHO-dhfr(二氢叶酸还原酶
基因缺点型细胞)细胞系。
2.1.2细胞库成立、传代及保留
由原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为主细胞库；从主细胞库的细胞传代，
扩增后冻存于液氮中，作为工作细胞库。每次传代不超过经批准的代次。细胞系冻存于液氮中，
检定合格后方可用于生产。
2.1.3主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.3.1外源因子检查
细菌和真菌、支原体、病毒检查均应为阴性。
2.1.3.2细胞辨别实验
应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传标记物等任一方式进行辨别，应为典型
CHO细胞。
2.1.3.3人促红素表达量
应不低于原始细胞库细胞表达量。
2.1.3.4目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。
原液
2.2.1细胞的苏醒与扩增
从工作细胞库来源的细胞苏醒后，于含灭能小牛血清培育液中进行传代、扩增，供转瓶或细
胞培育罐接种用。小牛血清的质量应符合规定（附录ⅩⅢD）。
2.2.2细胞培育液
生产用细胞培育液应不含牛血清和任何抗生素。
2.2.3细胞培育
细胞培育全进程应严格依照无菌操作。细胞培育时刻可依照细胞生长情形而定。
2.2.4分离纯化
搜集的培育液按经批准的纯化工艺进行，采纳经批准的超滤法或其他适宜方式进行浓缩，多
步色谱纯化后制得高纯度的重组人促红素，即为人促红素原液，除菌过滤后保留于适宜温度，并
规定其有效期。
2.2.5原液检定
按项进行。
半成品
2.3.1配制与除菌
原液加入适宜稳固剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即为半成品。
2.3.2半成品检定
按项进行。
成品
2.4.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3规格
应为经批准的规格。
2.4.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
原液检定
3.1.1蛋白质含量
用4g/L碳酸氢铵溶液将供试品稀释至ml，作为供试品溶液。以4g/L碳酸氢铵溶液作为空白
测定供试品溶液在320nm，325nm，330nm，340nm，345nm和350nm的吸光度。用读出的吸光度的
对数与其对应波长的对数做直线回归，求得回归方程。照紫外-可见分光光度法（附录IIA），在
波长276nm～280nm处，测定供试品溶液最大吸光度A，将A对应波长带入回归方程求得供试
maxmax
品溶液由于光散射产生的吸光度A。按下式计算，应不低于mg/ml。
光散射
蛋白质含量（g/100ml）=（A-A）÷×供试品稀释倍数
max光散射
3.1.2生物学活性
3.1.2.1体内法
依法测定（附录ⅩB）。
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