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细菌对抗菌药物敏感试验

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AST第一节抗菌药物一.抗菌药物能抑制或杀死微生物有一定的毒副作用有一定的抗菌谱细菌可对其产生耐药性变异二.常用抗菌药物种类抗生素:?-内酰胺类抗生素:青霉素,头孢菌素,其他?-内酰胺类抗生素,?-内酰胺类酶抑制剂氨基糖苷类大环内酯类抗菌药物磺胺药喹诺酮类呋喃类甲硝唑第二节耐药性细菌不能被常规治疗剂量达到的药物血浓度杀死或抑制称一.概述耐药性形成是因为细菌的基因突变或获得了耐药基因耐药性可在株间,种间传递抗菌药物仅对耐药菌起选择作用细菌对抗菌药物的耐药性可以是多重的细菌对结构相似药物间,可有交叉耐药性二.耐药性产生机制?-内酰胺类酶形成:破坏?-内酰胺类药物,有多种钝化酶:使抗生素失活,如氨基糖苷类靶位改变:形成新的,低亲合力的青霉素结合蛋白渗透障碍或外排作用:使药物不易进入菌细胞内代谢途径改变:绕过药物作用环节第三节细菌对抗菌药物的敏感性试验一.药敏试验目的指导被试患者用药某一地区的耐药性调查鉴定细菌新药评价二.药敏试验原理将细菌接种在无被测药拮抗剂并能提供细菌良好生长的环境中加入一定量抗菌药物观察细菌生长被抑制情况三.被测药物选择按菌种和抗菌谱同类药物选一个按医生要求按医院感染科规定四.药敏试验方法

1.稀释法可在液体或固体培养基中进行用培养基对抗菌药物作一系列稀释加入一定量细菌孵育后读取MIC转种未生长管并计数细菌后读取MBC附:血清抗菌活性测定将患者血清作系列稀释测自身感染部位分离出的病原菌的最低抑菌和杀菌效价2.纸片琼脂扩散法(K-B法)以一定量细菌在平板表面紧密接种,让其长成均匀的菌苔置数张含定量抗菌药物的纸片于其上,其间需有一定间距孵育后测定抑菌环直径抑菌环大小和MIC的高低呈负相关附:血清抗菌药物浓度测定按纸片琼脂扩散法进行用不同量抗菌药物的抑菌环直径对浓度作标准曲线测定血清抑菌环后通过标准曲线查到浓度3.E试验结合稀释法与纸片琼脂扩散法纸条上有药物的浓度梯度在纸条与抑菌环交界处读取抑菌浓度(IC)4.联合抗菌试验观察两种抗菌药物间的相互关系:协同,相加,无关,拮抗可用两药分别稀释后混合的方法法测MIC或MBC读取FIC或用临近置两药纸片的琼脂扩散法进行,观察抑菌圈的形状FIC的读取A药联合时的MICB药联合时的MICFIC=+A药单测时的MICB药单测时的MIC6.双相纸片试验用于检测ESBL(extendedspectrumβlactam)该酶为克拉维酸抑制按纸片琼脂扩散法进行,中心贴阿莫西林/克拉维酸,周边贴头孢曲松等作为指示孵育后,如抑菌环向中心扩大,为阳性也可分别测量抑菌环,相差5mm以上为阳性5.?-内酰胺类酶检测碘淀粉测定法:被测菌置青霉素溶液中,室温30min,加淀粉和碘液,呈蓝色,震摇,若酶阳性,生成青霉素噻唑酸与碘结合,10min内蓝色消失头孢硝噻吩滤纸片法:置被测菌于商品头孢硝噻吩滤纸片上,由黄变红为阳性影响药敏试验的因素培养基:成分,厚度,表面湿度菌液;菌龄,菌量抗菌药物:量,效期观察时间:质控:室内,室间0.5协同0.5~1相加1~2无关2拮抗**药浓度MIC不同菌株血药浓度治疗剂量中毒剂量耐药株敏感株药502512.56.33.21.60.80.40加入等量细菌,孵育18-24h结果－－－－+++++12345678C计数0105368760/ml48万*MIC6.3μg/mlMBC12.5μg/ml(＜0.1%