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ICS65.020.01B04
中华人民共和国国家标准
农业部2406号公告一7—2016
转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化
Detectionofgeneticallymodifiedanimalsandderivedproducts—DNAextractionandpurification
2016-05-23发布2016-10-01实施
中华人民共和国农业部发布
I
农业部2406号公告—7—2016
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会(SAC/TC276)归口。本标准起草单位:农业部科技发展中心、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。
本标准主要起草人:敖红、沈平、李奎、宋贵文、崔文涛、章秋艳、周荣、金芜军、陶聪、赵为民、黄素娟、
甄二东。
1
农业部2406号公告一7—2016
转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化
1范围
本标准规定了转基因动物及其产品中DNA提取和纯化的方法和技术要求。本标准适用于转基因动物及其产品中DNA的提取和纯化。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所得的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
通过物理和化学方法使DNA从样品的不同组分中分离出来。利用不同的纯化方法,弃除样品中的蛋白质、脂肪、多糖和其他次生代谢物,以及DNA提取过程中加入的氯仿、异戊醇等化合物,获得纯化的DNA。
4主要试剂和材料
除非另有说明,仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682二级水要求的水。
4.1异戊醇(C?H??O)。
4.2氯仿(CHCl?)。
4.3乙醇(C?H?OH),体积分数为95%。
4.4二水乙二铵四乙酸二钠盐(Na?EDTA·2H?O,C??H?N?O?Na?·2H?O)。
4.5十二烷基硫酸钠(C??H??O?SNa,SDS)。
4.6盐酸(HCl),体积分数为37%。
4.7异丙醇[CH?CH(OH)CH?]。
4.8蛋白酶K(20U/mg)。
4.9乙酸钾(KAc)。
4.10氯化钠(NaCl)。
4.11氢氧化钠(NaOH)。
4.12三羟甲基氨基甲烷(C?H??NO?,Tris)。
4.13磷酸氢二钠(Na?HPO?)。
4.14磷酸二氢钾(KH?PO?)。
4.15甲醛(HCHO),体积分数为35%~40%。
4.16聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-x100)。
4.1710mol/L氢氧化钠溶液:在160mL水中加入80.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后再加水定容至
200mL。
4.180.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na?),加入70mL水中,再加入适量氢氧化钠溶液,加热至完全溶解后,冷却至室温,用氢氧化钠溶液(4.17)调
2
农业部2406号公告一7—2016
pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。
4.191mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶解于
800mL水中,用盐酸(HCl)调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20
min。
4.205mol/L氯化钠溶液:称取29.22g氯化钠(NaCl)溶于80mL水中,加水定容至100mL。在
103.4kPa蒸汽压(121℃)条件下灭菌20min。
4.213mol/L乙酸钾溶液(pH4.8):称取29.43g乙酸钾(KAc)溶于60mL水,用冰乙酸(HAc)调pH至4.8,加水定容至100mL。在103.4kPa蒸汽压
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