SN∕T 4807-2017 进出口食用动物、饲料中杆菌肽的检测方法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4807—2017

进出口食用动物、饲料中杆菌肽的检测方法

Determinationofbacitracininanimalsandfeedsforimportandexport

2017-07-21发布2018-03-01实施

中

中华人民共和国

发布

I

SN/T4807—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：张晓文、张晓梅、郑小龙、刘靖靖、王凤美、王群、王培峰、张金玲。

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SN/T4807—2017

进出口食用动物、饲料中杆菌肽的检测方法

1范围

本标准第一法规定了进出口食用动物血液和饲料中杆菌肽A的液相色谱串联质谱测定方法，第二

法规定了进出口食用动物和饲料中杆菌肽的ELISA检测方法。

本标准适用于进出口食用动物(猪、牛、羊、禽)血液和饲料中杆菌肽的测定。

本标准适用于出入境检验检疫工作

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

第一法进出口食用动物血液和饲料中杆菌肽A检测方法—液相色谱串联质谱法

3方法提要

试样经粉碎、均质后，用甲醇-甲酸水溶液提取样品中的杆菌肽A残留.用固相萃取小柱净化，液相

色谱-串联质谱测定，外标法定量。

4试剂

除非另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1二氯乙酸。

4.2EDTA。

4.3TCA。

4.4甲醇：色谱纯。

4.5乙腈：色谱纯。

4.6甲酸：色谱纯。

4.71.5mmol/LEDTA溶液：称取0.5gEDTA于容量瓶中，加水定容至1000mL。4.81%TCA溶液：称取10.0gTCA于容量瓶中，加水定容至1000mL。

4.90.1%的甲酸-水溶液：移取1mL甲酸于容量瓶中，加水定容至1000mL。

4.104%三氯乙酸-乙腈溶液：移取4mL二氯乙酸于容量瓶中，乙腈定容至100mL。

4.11定容液：0.1%甲酸-水溶液利乙腈体积比为8:2。

4.12杆菌肽A标准品：纯度≥96.0%。

4.13标准储备液：准确称取杆菌肽标准品，用甲醇(4.3)溶解定容至10mL,溶液浓度为1000μg/mL。

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此储备液可在-18℃以下避光存放12个月。

4.14标准中间液：准确吸取杆菌肽A标准储备液500μL甲醇定容至10mL,配置浓度为50μg/mL的标准中间液，此中间液可在-18℃以下避光存放6个月。

4.15标准工作液：将杆菌肽A中间液用0.1mol/L甲酸稀释至1μg/mL,现用现配。

4.16基质标准工作液。

4.17固相萃取柱：亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物。

4.18BEHC18:1.7μm,50mm×2.1mm。

4.19滤膜：0.22μm

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪液相色谱：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2高速冷冻离心机。

5.3高速组织捣碎机。

5.4氮气浓缩装置。

5.5快速混匀器。

5.6移液器：0.1mL,0.2mL,1.0mL,5.0mL。

5.7均质器。

5.8分析天平：感量为0.01g和0.01mg。

5.94.17同相萃取柱：60mg。

5.10聚四氟乙烯离心管：50mL。

5.11进样瓶：1.5mL。

5.12基本型水平振荡器。

5.13超声波仪。

5.14一次性注射式滤器：配有0.2μm微孔滤膜。

6分析步骤

6.1制备与保存

6.1.1血液的制备和保存

无菌采集静脉血10mL放于含有抗凝血剂的试管中，-18℃以下长期保存。

6.1.2饲料样品制备和保存

从所取原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机捣碎，用四分法缩分出不少于500g试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作试样，一份作留样。样品于-18℃保存。

6.2分析步骤6.2.