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ICS11.220
B41
NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2960一2016
兔病毒性出血病病毒RT-PCR.检测方法
DetectingmethodforrabbithaemorrhagicdiseasevirusbyRT-PCR
2016-10-26发布2017-04-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T2960-2016
目IJi!§i
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、江苏省农业科学院兽医研究所、河南牧业经济
学院。
本标准主要起草人:邵卫星、王芳、魏荣、胡波、徐耀辉、魏后军、孙映雪、李卫华。
I
NY/T2960-2016
兔病毒性出血病病毒RT-PCR检测方法
1范围
本标准规定了检测兔病毒性出血病病毒RTPCR检测方法的技术要求。
本标准适用于检测疑似兔病毒性出血矗菌由-画晶孟』庄器及鼻腔分泌物的兔病毒性出血病病
毒核酸。
2
dNTPs:
3仪器设备
3.1
高速冷担
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6微量移液器co.
3.7凝胶成像系统(或州
3.8生物安全柜。
4试剂
4.1AMV反转录酶或其他反转录酶。
4.2RNA酶抑制剂。
4.3TaqDNA聚合酶。
4.4dNTPs。
4.5TRIZOLRNA提取试剂。
4.61.0%琼脂糖凝胶,见A.1。
4.75×TBE缓冲液,见A.2。
4.8DNA染料:澳化乙链CEB)。
1
NY/T2960-2016
警告:电泳中用到的EB可诱发基因突变,在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要
有专用收集处,并进行无害化处理。
4.9焦碳酸二乙醋CDEPC)水,见A.3。
警告:DEPC对眼睛和呼吸道黠膜有强剌激,在操作中应在通风条件下进行。使用时戴手套和口
罩,不小心沾到皮肤应立即冲洗。
4.10异丙醇:一18℃以下预冷。
4.1175%乙醇:一18℃以下预冷。
4.12氯仿。
警告:氯仿毒性属中等毒性,吸入或经皮肤吸收会引起人体不适及皮肤黠膜剌激症状,在操作中应
在通风条件下进行。使用时戴手套和口罩,不小心沾到皮肤应立即冲洗。
4.13DNA分子量标准CDL2000DNAMarker)。
4.146×电泳上样缓冲液。
5寻|物
5.1反转录引物见B.1。
5.2PCR引物见B.2。
6操作程序
6.1样品的采集及处理过程的注意事项
采样过程中样本不得交叉污染,采样、样品处理及RNA提取过程中应戴一次性手套和口罩。
6.2样品的采集及处理
6.2.1肝脏等脏器的采集和处理
无
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