NYT2960-2016 兔病毒性出血病病毒RT-PCR检测方法.pdf

ICS11.220

B41

NY

中华人民共和国农业行业标准

NY/T2960一2016

兔病毒性出血病病毒RT-PCR.检测方法

DetectingmethodforrabbithaemorrhagicdiseasevirusbyRT-PCR

2016-10-26发布2017-04-01实施

中华人民共和国农业部发布

NY/T2960-2016

目IJi!§i

本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。

本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、江苏省农业科学院兽医研究所、河南牧业经济

学院。

本标准主要起草人：邵卫星、王芳、魏荣、胡波、徐耀辉、魏后军、孙映雪、李卫华。

I

NY/T2960-2016

兔病毒性出血病病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了检测兔病毒性出血病病毒RTPCR检测方法的技术要求。

本标准适用于检测疑似兔病毒性出血矗菌由－画晶孟』庄器及鼻腔分泌物的兔病毒性出血病病

毒核酸。

2

dNTPs:

3仪器设备

3.1

高速冷担

3.2

3.3

3.4

3.5

3.6微量移液器co.

3.7凝胶成像系统（或州

3.8生物安全柜。

4试剂

4.1AMV反转录酶或其他反转录酶。

4.2RNA酶抑制剂。

4.3TaqDNA聚合酶。

4.4dNTPs。

4.5TRIZOLRNA提取试剂。

4.61.0%琼脂糖凝胶，见A.1。

4.75×TBE缓冲液，见A.2。

4.8DNA染料：澳化乙链CEB）。

1

NY/T2960-2016

警告：电泳中用到的EB可诱发基因突变，在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要

有专用收集处，并进行无害化处理。

4.9焦碳酸二乙醋CDEPC）水，见A.3。

警告：DEPC对眼睛和呼吸道黠膜有强剌激，在操作中应在通风条件下进行。使用时戴手套和口

罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。

4.10异丙醇：一18℃以下预冷。

4.1175%乙醇：一18℃以下预冷。

4.12氯仿。

警告：氯仿毒性属中等毒性，吸入或经皮肤吸收会引起人体不适及皮肤黠膜剌激症状，在操作中应

在通风条件下进行。使用时戴手套和口罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。

4.13DNA分子量标准CDL2000DNAMarker）。

4.146×电泳上样缓冲液。

5寻｜物

5.1反转录引物见B.1。

5.2PCR引物见B.2。

6操作程序

6.1样品的采集及处理过程的注意事项

采样过程中样本不得交叉污染，采样、样品处理及RNA提取过程中应戴一次性手套和口罩。

6.2样品的采集及处理

6.2.1肝脏等脏器的采集和处理

无