基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价.pdfVIP

基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价

1范围

本文件规范了基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价的术语和定义、原理、材料和试剂、

仪器设备、检测步骤和数据处理。

本文件适用于甘蔗组培苗、种苗、种茎及大田植株的宿根蔗宿根性的早期评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

甘蔗宿根性Sugarcaneperennial

甘蔗宿根性是指甘蔗在收斩后留下的地下蔗茎和根系继续存活并再次发株的能力，其强弱表现在宿

根发株的快慢强弱和数量，最终成茎率、有效茎数和产蔗量高低等。

3.2

酶联免疫法Enzymelinkedimmunosorbentassay

酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗

原抗体结合的专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

3.3

缩略语Acronym

下列缩略语适用于本文件。

ABA:脱落酸(Abscisicacid)

IAA:生长素(Indoleaceticacid)

GA3:赤霉素(Gibberellin)

CAT:过氧化氢酶(Catalase)

SOD:超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)

PAL:苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanineammonia-lyase)

SS:蔗糖合成酶(Sucrosesynthase)

4原理

在甘蔗宿根性的研究中，植物激素如生长素（IAA）、赤霉素（GA）、脱落酸（ABA）等，可能

影响蔗芽的萌发、根系的发育和植株的整体生长。过氧化氢酶（CAT）、植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）

与宿根性正相关，而植物蛋白酶（Prot）、植物蔗糖合成酶（SS）指示植物对逆境的响应能力，它与宿

根性负相关。通过测量与这些过程相关的激素和酶含量，可以间接反映甘蔗的宿根性。

样品经处理后，采用ELISA试剂盒进行酶联免疫吸附分析，用酶标仪在相应波长下测定吸光度（OD

值），通过标准曲线计算样品中植物激素和酶的浓度。

1

将得到内源激素和酶的浓度值，采用改进的极点排序法进行评分，得到各指标的的权重系数，根据

鉴评矩阵得到各品系各指标的对应得分，得分与各指标权重系数相乘即为最后综合评价值，综合评价值

越高，说明该品系的宿根性越好。

5材料和试剂

5.1材料

种植在同一地块、同种栽培管理方式、同一宿根年限、不同甘蔗品种的宿根蔗，采取甘蔗萌发初期

的幼根为检测材料。

5.2试验设计及田间管理

试验采用随机区组田间设计，5行区，行长7m，行距1.2m，每个品种种植3个小区。新植蔗当

年3月种植，采用双芽种茎以双行品字形排列种植，下种密度为12.8芽/m。新植蔗成熟后于次年1月

收获，保留宿根，宿根蔗次年1月收获。新植蔗和宿根蔗的田间管理均与当地甘蔗高产栽培管理相同。

5.3ELISA试剂盒

IAA检测试剂盒、ABA检测试剂盒、GA3检测试剂盒、CAT检测试剂盒、SOD检测试剂盒、Prot检

测试剂盒、PAL检测试剂盒、SS检测试剂盒。除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合

GB/T6682中三级水的要求。见附录A。

6仪器设备

6.1分光光度计

波长范围（325nm～800nm），波长准确度（±2nm）。

6.2酶标仪

波长范围（200nm～1000nm）,精度：SD0.001Abs或CV0.5%，@450nm(0Abs～3Abs)。

6.3培养箱

控温范围：RT+5～RT+65，输入功率：450W，定时范围：1min～9999min。

6.4移液器

10µL～100µL、20µL～200µL、100µL～1000µL。

6.5离心机

转速100rpm～14800rpm，步长100rpm，容量1.5mL/2.0mL