土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件.pptVIP

专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶脲酶+CO2CO(NH)+HO2222NH3

3、常见的分解尿素的微生物(异养需氧型)芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌。硝化细菌、固氮菌、根瘤菌：硝化细菌固氮菌异养需氧型有机物根瘤菌异养需氧型代谢方式自养需氧型能量来源NH3豆科植物的有机物转换过程将NH转变成固氮酶催化机理总反应式为：在固氮酶的作用下，N+8e-根瘤中的菌体将分+16Mg·ATP+16HO→2子态氮转化为氨态3NO2-、NO-32+8H+2NH+H+16Mg·ADP+16Pi氮（同左）32

4、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌㈠.筛选菌株一.研究思路㈡.统计菌落数目㈢.设置对照

1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93的DNA聚合酶。0C）原因：因为热泉温度70～80C，淘汰了绝大多0数微生物只有Taq细菌被筛选出来。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：KHPO24NaHPO1.4g2.1g24MgSO7HO葡萄糖0.2g4`210.0g1.0g15.0g唯一氮源尿素琼脂①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？固体培养基选择培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素

具有〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是。只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

4、培养基选择分解尿素的微生物的原理培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

※几种常见选择培养基1、加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌2、不加氮源的无氮培养基分离固氮菌3、不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物4、加入高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌

㈡.统计菌落数目：1.间接计数法（活菌计数法）（1）常用方法：稀释涂布平板法。当样品的稀释度足够高时，培养基表（2）原理：面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

注意事项:①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布至少3个平板，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

教材P22如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？?统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算

㈡.统计菌落数目：2、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；

实例分析P22你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？

实例分析P22第一同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

（三）.设置对照：设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实例：教材P23原因：⑴土样不同⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)

方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样