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实验十六 转氨基作用
【目的】
氨基酸的转氨作用在体内所有器官组织几乎都能进行，但不同的组织器官ALT（GPT）的活性大小不同。
【原理】
丙氨基酸与α-酮戊二酸在Ph7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小。本实验以肝和肌进行比较。
ALT
丙氨酸+α–酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸37℃
丙酮酸+2,4–二硝基苯肼 丙酮酸二硝基苯腙（棕红色）
【试剂】
1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）
称取磷酸氢二钠（NaHPO）11.928g,磷酸二氢钾(KHPO)2.176g加蒸馏水溶解并稀释至
2 4 2 4
1000ml。
2．ALT基质液
称取DT-丙氨酸1.79g,α-酮戊二酸29.2mg于烧瓶中,加0.1mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后待冷,用1mol/LNaOH调节pH至7.4(约加0.5ml),再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释到100ml,混匀加氯仿数滴置冰箱可保存数周。
3．2，4-二硝基苯肼溶液
2，4-二硝基苯肼19.8mg用10mol/LHCl10ml溶解后,加蒸馏水100ml,置于棕色瓶内,冰箱保存。
4.0.4mol/L氢氧化钠溶液
将16g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml。
【器材】
乳钵和细砂、滴管、试管、试管架、恒温水浴箱。
【操作】
将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4缓冲液10ml加细砂研碎,研成匀浆后再加pH7.4缓冲液20ml混匀,用棉花过滤,此即为肝和肌的浸提液.
取试管2支按下表操作：
表3-18
转氨基作用操作步骤
ALT
肝
肌
置37℃ 2，4-二硝
置37℃
0.4
管号
基质液
浸液
浸液
水浴 基苯肼
水浴
mol/LNaOH
1
1ml
3滴
20分钟 10滴
20分钟
5ml
2
1ml
3滴
20分钟 10滴
20分钟
5ml
【结果及分析】
【思考题】
比较两管颜色，说明哪种组织ALT活性高，为什么？
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