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骨髓间充质干细胞移植联合吡菲尼酮治疗肺间质纤维化的研究

摘要目的探讨吡菲尼酮（PFD）联合骨髓间充质干细胞（MSCs）移植入

博来霉素（BLM）诱导肺纤维化小鼠的疗效。方法36只健康清洁级体重200g

雄性SD大鼠，随机分为6组，A组为阴性对照组、B组阳性对照组、C组单

纯激素治疗组、D组单纯MSCs移植组、E组单纯PFD治疗组、F组PFD联合

MSCs移植组，各6只。SD大鼠体外培养MSCs，注入BLM制备肺纤维化

模型，观察肺组织形态学变化，测定转化生长因子（TGF-β1）的蛋白表达。

结果造模7d后，C、D、E、F组大鼠出现炎症细胞浸润比B组减少，肺纤

维化程度明显减轻，F组较C、D、E组的病理改变更轻，肺纤维化不明显。

肺系数中B组下降明显，与A组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。B、C、D、

E、F组肺纤维化评分高于A组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肺组织中转化

生长因子胶原表达的阳性细胞数明显减少，F组较B、C、D、E组数量减少和

强度减弱更加明显，A组与B、C、D、E、F组比较，差异有统计学意义（P

＜0.05），C、D、E组间差异无统计学意义（P0.05）。结论骨髓间充质干细胞

移植联合吡菲尼酮对肺纤维化有一定的抑制作用，能够降低肺组织转化生长因

子的表达，有修复和再生作用，治疗肺纤维化效果明显。

关键词吡菲尼酮；骨髓间充质干细胞；大鼠；肺间质纤维化；转化生长因

子

特发性肺纤维化（IPF）是由于肺泡上皮的损伤及纤维细胞增殖，最终形成

成纤维细胞灶，是一种严重的弥漫性肺间质疾病，发病率和死亡率均较高，对

患者家庭及社会造成严重影响。IPF发病机理不明，临床症状不明显，无特效

药物治疗，不能治愈与逆转[1]。传统糖皮质激素等药物治疗作用有限，寻找

一种安全有效、新型低毒抗肺纤维化药物已经迫在眉睫。随着医学科技的发展，

以MSCs移植治疗肺纤维化中有积极的效果，同时吡啶酮类化合物也能够预防

和逆转细胞外基质的产生，防治纤维化效果良好。本实验就PFD联合MSCs移

植对大鼠肺纤维化模型进行干预，为防治肺纤维化提供实验依据。现报告如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物选取36只健康清洁级体重200g雄性SD大鼠，室温27℃，湿

度70%，垫料干燥，由北京维通利华动物公司提供[动物合格证号：scxk（京）

2007-0001]。随机分为6组，A组为阴性对照组、B组阳性对照组、C组单纯激

素治疗组、D组单纯MSCs移植组、E组单纯PFD治疗组、F组PFD联合MSCs

移植组，各6只。

1.1.2试剂与仪器低糖DMEM培养基购自Gibco，免疫组化试剂盒购自

南昌长城生物工程公司，转化生长因子购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2方法

1.2.1大鼠MSCs的分离、培养及标记SD大鼠断颈处死，无菌分离股骨

和胫骨，暴露骨髓腔，低糖DMEM培养基冲洗，收集混浊液即骨髓细胞，低

温离心后弃去上清液，制成细胞悬液，计数后接种于培养瓶，消化传代，收

集第四代细胞用于实验。

1.2.2体内细胞移植A组，第1天气管内注射生理盐水2ml/kg0.3ml；B

组，第1天气管内注射0.3mlBLM5mg/kg；C组，第1天同B组，第2天，

给予地塞米松0.5mg/kg，连续3d；D组，第1天注射BLM5mg/kg，MSCs

（5×105/200μlPBS）移植；E组，第1天注射BLM5mg/kg，0.3ml，第2

天，给予吡菲尼酮0.5mg/kg，共7d；F组：第1天注射BLM5mg/kg，MSCs

移植，第2天，给予吡菲尼酮0.5mg/kg，共7d。

1.2.3肺纤维化模型制备使用BLM诱导建立模型，腹腔麻醉后，取出

肺组织，称肺湿重，加入固定液使肺复张，脱水、透