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无菌检查阳性结果原因分析方法探讨

无菌检查阳性结果原因分析方法探讨

药品无菌检查出现阳性结果的原因复杂，主要和实验环境、实验

用品、操作人员无菌操作规范程度及供试品真实的无菌水平等有关，

本文重点阐述与出现阳性结果有关的诸多实验环境等因素，意在为微

生物检验人员作阳性结果原因分析时提供参考。

一．相关因素

1．实验用器皿等相关因素：

实验用器皿、用具等因素可从包括药品外包装上的染菌量、酒精

棉球等消毒剂的含菌量（无菌配制，非无菌配制）、培养器的无菌性

能、培养基的无菌性等方面考虑。重点介绍药品外包装上的染菌量、

酒精棉球等消毒剂的含菌量（无菌配制，非无菌配制）测试2．实验环

境因素：

无菌检查过程中的空气沉降菌、工作台面的染菌量、无菌工作服

染菌量。

3．实验人员因素：

操作人员双手染菌量、不规范操作。

二．验证方法

1．无菌检查实验用器皿等

1.1首先应目视检查供试品、无菌培养器包装有否开裂、破损。发

现包装破损的不得使用；

1.2培养基包装的塞子是否松动，有松动现象的应不得使用；

1.3药品外包装的消毒有效性

药品外包装上的染菌量不容忽视，必须经充分消毒后转移到无菌

操作台面。

药品外包装上的染菌量验证可采用下述方法进行：

（1）取供试品外包装未经消毒直接置紫外灯下30分钟后取样。

（2）取供试品经酒精棉球或消毒液浸泡一定时间，擦干后再暴露

在紫外灯下30分钟后取样。

供试液制备：

取供试品3个包装，分别用无菌镊子夹住经无菌氯化钠溶液湿润

的无菌棉球，擦拭一周，棉球置100ml无菌氯化钠溶液，另取一块无

菌棉球重复擦拭一遍，制成供试液。供试液振摇1分钟经开放式滤膜

法过滤、取滤膜培养、计数，得到的数据即可比较药品外包装2种消

毒方法的消毒效果。

1.4酒精棉球等消毒剂的含菌量测试

酒精棉球等消毒剂的含菌量测试，可分别测试无菌配制及非无菌

配制的消毒剂的含菌量，还需注意新鲜配制的与反复使用的消毒剂含

菌量的变化。

测试方法可采用开放式滤膜法过滤、取滤膜培养、计数，得到的

数据即可比较不同方法配制及不同时间使用的消毒剂的含菌量。

1.4.1无菌室常用消毒剂的配制：

无菌室使用的消毒剂应在净化台面上配制，需过滤的应准备已灭

菌的滤器。配好的消毒剂应在盛放的瓶子上标明名称、配制日期、失

效期等。

1.4.1.175％酒精棉球：

取95％的酒精，加注射用水制成75％的酒精溶液，取该溶液用

0.22μm微孔滤膜过滤后放入已灭菌的瓶中，备用。取经121℃30分

钟灭菌的脱脂棉球，置无菌包装内，倒入75％的酒精溶液，即得。该

酒精棉球在48h内使用。如取成品消毒酒精配制的，脱脂棉球需经

121℃30分钟灭菌。

1.4.1.20.1％新洁尔灭溶液的配制：

取注射用水，加入不同浓度的新洁尔灭溶液，使成0.1％浓度，并

搅拌均匀，将配制好的溶液用0.22μm微孔滤膜过滤后放入已灭菌的

瓶中，备用。此溶液应在48h内使用。

2实验环境因素无菌检查过程中的空气沉降菌测试、工作台面的染

菌量测试、无菌工

作服染菌量测试

2.1无菌实验应选用10000级环境下置100级净化台或操作台面

的无菌室或无菌隔离器中进行。无菌室的洁净度测试可参照洁净室洁

净度检查的方法进行并判定。

2.2无菌检查过程中的无菌室环境监测，可采用空气沉降菌测试来

完成。

2.3工作台面的染菌量测试

取样时间，按正常的程序消毒，待实验结束后取样。

供试液制备：取5×5cm的灭菌标准规格板，放在净化台操作区表

面，用浸有无菌氯化钠溶液的棉拭子在规格板内来回涂抹，棉拭子剪

去手握部位后放入100ml无菌氯化钠溶液中制成供试液，以同法操作

采样2个表面。振摇供试液，备用。供试液经开放式滤膜法过滤、取

滤膜培养、计数，即可得到工作台面的染菌量。

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