NYT 2289-2012 小麦矮腥黑穗病菌检疫检测与鉴定方法.docxVIP

ICS65.020B16

中华人民共和国农业行业标准

NY/T2289—2012

小麦矮腥黑穗病菌检疫检测与鉴定方法

DetectionandidentificationofTilletiacontroversaKühn

2012-12-24发布2013-03-01实施

中华人民共和国农业部发布

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NY/T2289—2012

前言

本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)归口。

本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、四川省植物检疫站、重庆大学。

本标准主要起草人：王福祥、刘可、王中康、宁红、熊红利、殷幼平、刘慧、李潇楠、万佳。

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NY/T2289—2012

小麦矮腥黑穗病菌检疫检测与鉴定方法

1范围

本标准规定了农业植物检疫中小麦矮腥黑穗病菌(TilletiacontroversaKühn,TCK)样品采集、样品处理、实验室形态学、实时荧光PCR检验及结果判定和除害处理的技术方法。

本标准适用于小麦种子、籽粒及产品、生长期植株小麦矮腥黑穗病菌的检疫检测和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB7412小麦种子产地检疫规程GB15569农业植物调运检疫规程

GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

小麦矮腥黑穗病Dwarfbuntdisease

由小麦矮腥黑穗病菌(TilletiacontroversaKühn,TCK)引起的麦类真菌病害，特征表现为罹病植株矮化，病穗麦粒变为病原菌冬孢子构成的菌瘿，不能食用，导致严重的产量损失并影响小麦加工产品品质。

3.2

网脊高度值Reticulumheight

指腥黑穗病菌冬孢子外胞壁向外突起的垂直高度值，在光学显微镜下表现为冬孢子外胞壁的刺状或齿状突起的垂直高度。

3.3

实时荧光定量PCRQ-PCR

也叫实时荧光聚合酶链式反应。是一种能在体外微量扩增的特殊DNA片段，在扩增过程中由于荧光物质的释放而实时快速、灵敏地检出模板DNA存在的方法。

3.4

Q-PCR阈值ThresholdofQ-PCR

PCR反应实时荧光强度超过背景荧光强度的值或检测值。

3.5

Q-PCRCt值CyclethresholdvalueofQ-PCR

实时荧光PCR反应检测样品的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.6

典型的扩增曲线Typicalamplificationcurve

一个典型的扩增曲线由三个阶段组成：荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。指数扩增阶段PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系。

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3.7

荧光染料SYBRGreenI

非特异性结合双链DNA的一种荧光染料，其荧光信号随着dsDNA扩增产物的增加而增强。

4原理

小麦矮腥黑穗病菌(TilletiacontroversaKühn,TCK),属担子菌门Basidiomycota,冬孢菌纲Te-liomycetes,黑粉菌目Ustilaginales,腥黑粉菌科Tilletiaceae,腥黑粉菌属Tilletia。病菌主要对小麦、大麦、黑麦等禾本科18属的农作物和杂草形成系统侵染，被侵染作物结实时形成菌瘿。病菌以冬孢子附着在种子外表或混入粪肥、土壤中越夏，随着受害种子、土壤和肥料的远距离运输而传播；也可以菌瘿形式混杂于种子中，远距离传播。小麦矮腥黑穗病菌的冬孢子形态、Q-PCR反应结果是本标准快速鉴定该病原菌的依据。

4.1冬孢子形态

小麦矮腥黑穗病菌冬孢子呈球形、椭圆形或不规则形，具网状饰纹和无色到淡色的胶质鞘，直径(含胶质鞘)为16.80μm~32.19μm,通常为18μm～24μm。冬孢子网脊高度值是小麦矮腥黑穗病菌和其近似种小麦网腥黑穗病菌(TilletiacairesTul.,TCT)冬孢子最重要的区别特征，前者的网脊高度值为1.43μm±0.14μm,后者为0.53μm±0.19μm。冬孢子自发荧光和萌发生理试验也可以作为进一步鉴定的依据。

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