药品微生物检验基础知识.ppt

三、菌种注意：标准储备菌株、工作菌株都应进行纯度和特性确认工作菌株的传代次数不得超过5代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代）“1代”是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养。实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、保存、确认试验及销毁的记录。第31页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种标准菌株：①冻干粉（图P63）②甘油冻存管（图P64）第32页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种菌种保藏机构：CMCC中国医学微生物菌种保藏管理中心GIMCC广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心ATCC美国典型菌种保藏中心例：CMCC（B）26003菌种保藏机构细菌菌种编号（金黄葡萄球菌）第33页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种2、菌种的鉴定金黄色葡萄菌CMCC(B)26003甘露醇平板上划线分纯，典型菌落为黄色圆形突起，表面湿润光滑；革兰氏染色：阳性，球菌。血浆凝固霉酶实验：阳性第34页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种2、菌种的鉴定大肠埃希菌CMCC(B)44102大肠埃希菌在麦康凯培养基上的菌落形态特征：鲜桃红色或微红色,菌落中心呈深桃红色,圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润革兰氏染色：阴性，杆菌。第35页,共61页，星期六，2024年，5月大肠埃希菌(Escherichiacoli)供试液制备和增菌培养取供试品，照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（通则1105）制成1：10供试液。取相当于1g或1mL供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定的）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24小时。第36页,共61页，星期六，2024年，5月大肠埃希菌(Escherichiacoli)

选择和分离培养?取上述预培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。第37页,共61页，星期六，2024年，5月大肠埃希菌(Escherichiacoli)结果判断?若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。第38页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种铜绿假单胞菌CMCC(B)10104溴化十六烷基三甲铵琼脂平板上划线分纯，典型菌落呈扁平，无定形、周边扩散，表面湿——灰白色，周围有蓝绿色素扩散。氧化酶实验：阳性绿脓菌素：阳性革兰氏染色：阴性，杆菌；第39页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种白色念珠菌CMCC(B)98001沙氏葡萄糖琼脂平板上划线分纯，典型菌落乳白色，表面光滑有浓酵母气味。革兰氏染色：阳性，菌体大，球菌。芽管试验：阳性第40页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种3、菌种的保藏A：甘油冷冻管保藏法保藏温度：－30℃～80℃；保藏菌种有效期：1～2年优点：保存期较长，反复传代导致菌种变异的风险较小；缺点：操作相对复杂，成本较高。B：斜面低温保藏法保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜用本法保存。优点：操作简便，成本低，比较容易掌握；缺点：保存期比较短，反复传代有引起变异的可能。。?保藏温度保藏有效期优点缺点甘油冷冻管保藏法-30℃～80℃1～2年·保存期较长，·反复传代导致菌种变异的风险较小·操作相对复杂，·成本较高斜面低温保藏法4℃左右1～3个月·操作简便，·成本低，·比较容易掌握·保存期比较短，·反复传代有引起变异的可能；·铜绿假单胞菌不宜用本法保存。第41页,共61页，星期六，2024年，5月甘油冷冻管保存菌种第42页,共61页，星期六，2024年，5月甘油冷冻管保存菌种第43页,共61页，星期六，2024年，5月甘油冷冻柜保存菌种第44页,共61页，星期六，2024年，5月三、菌种4、菌种的使用和销毁过期菌种应及时销毁，销毁时应经121℃30分钟的生物灭活处理。121℃45min高温蒸汽灭活。并进行菌种销毁记录。第45页,共61页，星期六，2024年，5月四、微生物限度检查法1、定义微生物限度检查法—系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。2