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XXXXX检测试剂盒

（XXXXX法）

主要生产工艺及反应体系的研究资料

XXXXX有限公司

主要生产工艺及反应体系研究主要生产工艺及反应体系研究

目录

一、主要生产工艺的优化1

（一）文库接头的配制研究1

二、反应体系的研究1

（一）样本的采集及处理1

（二）核酸片段化和补平反应体系研究1

（三）逆转录反应体系的研究3

（四）接头融化方式研究5

（五）连接酶的研究6

（六）扩增反应体系的研究7

三、质控方法10

（一）阴阳性对照品（每次检测质控方法）10

（二）企业参考品盘（试剂盒质量质控方法）10

四、生产工艺性能考核11

五、反应体系（检测流程）11

六、主要生产工艺小结11

七、生产工艺流程图12

主要生产工艺及反应体系研究主要生产工艺及反应体系研究

一、主要生产工艺的优化

（一）文库接头的配制研究

二、反应体系的研究

（一）样本的采集及处理

本试剂盒的检测对象为福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）的非

小细胞肺癌（NSCLC）组织样本，必须按照标准的病理学方法进行处

理和保存，以确保样本的质量，且采样不超过？年。用于提取的总核

酸的组织标本中肿瘤细胞含量应达20%以上。所有样本均视为有潜在

感染性的物品，操作时按国家相关标准执行。

-70℃冷冻样本，解冻后石蜡包埋：

手术后直接石蜡包埋后常温保存：

（二）核酸片段化和补平反应体系研究

1.试验目的

比较核酸片段化试剂和补平加尾试剂分开加入和同时加入的差

异。

2.检测对象

片段化缓冲液、片段化酶、连接缓冲液、连接酶1。

3.主要仪器

PCR仪、2100生物分析仪、荧光PCR仪、磁力架、移液器。

4.样本及来源

（细胞系或者临床样本均可）（细胞系或者临床样本均可）

1

主要生产工艺及反应体系研究

5.研究方法

使用核酸提取试剂对样本核酸进行提取，以其为模板分别进行片

段化处理和补平加尾处理。其中，片段化处理分别设5分钟和10分

钟反应时间，另外设片段化和补平、加尾步骤合并和分开加两类，两

个变量两两组合。产物经Agilent2100生物分析仪分析。

分段化处理设三个反应时间：5分钟、10分钟、15分钟，另外设

片段化和补平、加尾步骤合并和分开加两类，两个变量两两组合。产

物建库，考察文库产量，以不作FC处理作为对照。

6.试验结果

6.12100分析结果

Agilent2100分析结果如图分析结果如图06-2-1至06-2-4所示。

四组产物2100分析结果显示，。

6.2文库定量结果

六组处理的的文库定量结果如表6-2-1所示。

表6-2-1不同FB、FC处理条件的文库定量结果处理条件的文库定量结果