原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
生物化学实验讲义
PAGE
PAGE2
生物化学实验讲义
中南民族大学生命科学学院
实验教学中心
2006-2-22
生物化学实验讲义全文共1页，当前为第1页。
生物化学实验讲义全文共1页，当前为第1页。
目录
1.生物化学实验室规则
2.实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
3.实验二蛋白质含量的测定
4.实验三去污剂对红血球细胞膜稳定性的影响
5.实验四盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
6.实验五动物组织核糖核酸的制备及测定
7.实验六脲酶Km值的简易测定
8.实验七粗脂肪提取
9.实验八ATP的生物合成
10.实验九动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定
11.实验十胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
生物化学实验讲义全文共2页，当前为第2页。
生物化学实验讲义全文共2页，当前为第2页。
生物化学实验室规则
1每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3实验过程中要听从教员的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。完成实验后经教员检查签字同意，方可离开实验实。
4实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用毕，应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约。洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教员，不得擅自动手检修。
6实验室内严禁吸烟！注意水电安全，离开实验室前，必须关好水龙头，拉下电闸，严防发生事故！
7废液倒入专门的废液桶，固体废物和带残渣的废物不得倒入水槽或到处乱扔。
8仪器损坏时，应如实向教员报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9实验室内一切物品，未经本室负责教员批准，严禁携出室外，借物必须办理登记手续。
生物化学实验讲义全文共3页，当前为第3页。10每次实验课由班长负责安排值日生。值日生的职责是负责当天实验室的安全、卫生和一切服务性的工作。
生物化学实验讲义全文共3页，当前为第3页。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
实验目的
了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理
学习求标准曲线方程—最小二乘法
掌握分光光度计的使用
实验原理
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
实验步骤
求标准曲线方程
取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）
管号
G（mL）
蒸馏水（mL）
蒽酮（mL）
1
2
3
4
5
6
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
2.样品含糖量的测定
生物化学实验讲义全文共4页，当前为第4页。取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。
生物化学实验讲义全文共4页，当前为第4页。
吸取0.5mL滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。
最小二乘法求标准曲线方程的公式：
X：G的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T
本实验要求相关系数r≥0.99
思考题
本法多用于测定什么样品？
实验二蛋白质含量的测定
—Folin-酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝法（Brodford法）
一Folin-酚试剂法（Lowry法）
目的和要求
学
文档评论（0）