T_CVMA 165-2024 禽白血病病毒磁微粒化学发光检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准T/CVMA165—2024

禽白血病病毒磁微粒化学发光检测方法

Magneticparticlechemiluminescencemethodfordetectionofavianleukemiavirus

2024-5-23发布2024-5-23实施

中国兽医协会发布

T/CVMA165—2024

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东农业大学提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：禾旭（郑州）生物技术有限公司、山东农业大学、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：李秀梅、赵鹏、乔宏兴、刘近、任雪建、王一新、杨晓帆、常爽、吕园园、陶飞飞、杨志、杨转、刘明瑞、赵小月、殷笑丹、李亚静、阴思晴、施开创、尹彦文、冯淑萍、龙凤。

T/CVMA165—2024

1

禽白血病病毒磁微粒化学发光检测方法

1范围

本文件规定了禽白血病病毒磁微粒化学发光检测方法的试剂与耗材、器材与设备、实验前准备、操作步骤、试验成立条件和结果判定标准等内容。

本文件适用于泄殖腔拭子、胎粪、蛋清样品中禽白血病病毒的检测，适用于禽白血病的监测、流行病学调查等工作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

T/CVMA32禽白血病病毒抗原化学发光免疫分析检测方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

反应杯reactioncup

化学发光免疫分析仪配套使用的反应容器。3.2

示踪物tracer

吖啶酯标记的禽白血病病毒单克隆抗体。3.3

激发液excitationfluid

激发液由激发液A和激发液B组成，与化学发光免疫试剂配合使用，是一种辅助试剂，为发光过程提供碱性环境使用。

4符号和缩略语

下列缩略语适用于本文件。

T/CVMA165—2024

2

MES溶液：4-吗啉乙磺酸溶液（4-Morpholineethanesulfonicacidsolution）PBS：磷酸盐缓冲溶液（Phosphatebuffersaline）

MEST溶液：4-吗啉乙磺酸吐温溶液（4-MorpholineEthylsulfonicAcidTweenSolution）PBST：磷酸盐吐温溶液（PhosphatebuffersalineinTween）

NHS溶液：N-羟基丁二酰亚胺溶液（N-hydroxysuccinimidesolution）

5技术原理

采用夹心法的磁微粒直接化学发光检测技术检测禽白血病病毒抗原。将待测样品、禽白血病病毒抗体包被的磁性微球溶液反应一段时间后，再加入吖啶酯标记的禽白血病病毒单克隆抗体示踪物混合，孵育洗涤后，加入激发液A和激发液B；在碱性条件下，吖啶酯分子的发射光强度达到最大，通过测量的发光值结果和既定的判定方法判定待测样品的阴阳性。

6试剂与耗材

6.1磁性微球溶液，制备方法见附录A。

6.2示踪物，制备方法见附录B。

6.3阴性对照和阳性对照，制备方法见附录C。

6.4浓缩洗涤液，制备方法见附录D。

6.5稀释液，制备方法见附录D。

6.6激发液A，制备方法见附录D。

6.7激发液B，制备方法见附录D。

6.8其他相关试剂，制备方法见附录D。

6.9化学发光免疫分析仪，操作步骤见附录E。

7器材与设备

7.1最大离心力8,000r/min以上的离心机。

7.2化学发光免疫分析仪。

7.32℃~8℃冰箱，-20℃冰箱。

7.437℃温箱。

7.5规格为5mL和10mL的一次性采血器。

7.61.5mL灭菌离心管。

7.7反应杯。

T/CVMA165—2024

3

8实验前准备

8.1样品采集及处理

8.1.1蛋清样品

取全蛋，破碎后取蛋清，置-18℃以下冻融一次，用塑料吸头吸取