T_CVMA 162-2024 非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准T/CVMA162—2024

非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法

Visualloop-mediatedisothermalamplificationassayfordetectionofAfricanswinefevervirus

2024-5-23发布2024-5-23实施

中国兽医协会发布

T/CVMA162—2024

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件涉及专利。

本文件由北京市动物疫病预防控制中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：北京市动物疫病预防控制中心、北京农学院、大连海关技术中心、辽宁省动物疫病预防控制中心、大连民族大学、北京市密云区动物疫病预防控制中心、黑龙江省动物疫病预防与控制中心、北京市大兴区农业农村局检测检疫和疫病防控中心、新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站、中联瑞（北京）生物科技有限责任公司。

本文件主要起草人：王林、韦海涛、刘晓冬、吴迪、栗云鹏、崔德凤、张永红、黄大亮、贾赟、于本良、顾贵波、兰德松、曹际娟、王晓磊、郁茵、张君、唐宇、苏贵成、葛忠源、朱小清。

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II

引言

本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及条目6.1.1与《一种用于检测非洲猪瘟病毒的引物组、荧光可视化快速检测试剂盒及方法》相关专利的使用。

本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。

该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：

专利持有人姓名：北京市动物疫病预防控制中心地址：北京市大兴区生物医药基地祥瑞大街19号

请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

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非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法

1范围

本文件规定了非洲猪瘟病毒LAMP目视检测方法的试剂与耗材、仪器设备、操作步骤、结果判定。

本文件适用于猪全血、血清、口鼻拭子等液体样品，脾脏、扁桃体、淋巴结、肾脏、骨髓、肌肉等组织样品，饲料、污水、环境拭子等周边环境样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ASFV：非洲猪瘟病毒（AfricanSwineFeverVirus）DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcid）

LAMP：环介导等温扩增技术（Loop-mediatedisothermalamplification）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

5原理

本方法是针对非洲猪瘟病毒VP72基因设计合成特异性内引物、外引物和环引物，在Bst2.0DNA聚合酶的作用下，63℃反应55min，借助钙黄绿素的作用，肉眼观察反应液的颜色变化来判定结果，实现目视判读试验结果。

6试剂和耗材

6.1试剂

6.1.1引物

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针对非洲猪瘟病毒VP72基因设计的内引物、外引物和环引物。VP72基因核苷酸序列见附录A，引物序列见表1。

表1引物序列表

名称

序列

内引物FIP

5’-AGGGGTTACAAACAGGTTATTGATGGGAGTCATTAATGAAATCTCGC-3’

内引物BIP

5’-TACACAACCTTTTTGTAAAACGCGTATTGTTGGTGTGGGTCAC-3’

外引物F3

5’-CGCAATATACGCTTTAAACCA-3’

外引物B3

5’-ACATTAGTTTTTCATCGTGGTG-3’

环引物LB

5’-TCGCTTTTCGCTGATACGTG-3’

6.1.2ASFVLAMP