《驴鲜精稀释与冷藏保存技术规程》（征求意见稿）.docxVIP

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驴鲜精稀释与冷藏保存技术规程

1范围

本文件确立了驴鲜精稀释与保存的程序，规定了驴采精、鲜精稀释、鲜精保存，描述了档案管理证实方法。。

本文件适用于驴鲜精的稀释与保存。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T24877德州驴

NT/T3796马驴冷冻精液3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件3.1

冷藏温度refrigeratedtemperature0℃~5℃的保存温度。

3.2

台驴teaserjenny

用于公驴采精的发情母驴或假台驴。

4技术流程

驴鲜精稀释与保存技术流程包括采精、精液稀释、鲜精保存。驴精液稀释与保存技术流程见图1

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图1驴精液稀释与冷藏保存技术流程

5采精前准备

5.1环境

采精场地应洁净、宽敞、安静、通风良好，地面应平整、防滑，无阳光直射、无辐射，并设有安全防护栏。

5.2采精公驴

应符合GB/T24877一级的要求。

5.3器具

5.3.1器具在使用前做好清洗、烘干和消毒或使用一次性消毒制品。

5.3.2量筒、漏斗、无菌纱布、集精杯、离心管预先加热到37℃。

5.3.3水浴锅预热至37℃,恒温箱预热至22℃,显微镜恒温板预热至37℃~38℃。

6采精

6.1频率

每周可采精3～5次。

6.2方法

将公驴牵到台驴处，阻止其爬跨，使阴茎充分勃起后，用35℃~38℃温水清洗阴茎、龟头并用纸巾擦干。采精员一手持假阴道，站在公驴右前侧，待公驴爬跨台驴时，另一只手迅速将阴茎引入假阴道中，公驴阴茎抽动并贴紧台驴臀部，尾根有节奏摆动即开始射精。完成射精后，公驴随即而下，采精员手紧握假阴道，随公驴阴茎而下，待公驴前肢落地时，缓慢将假阴道脱出并立即抬起假阴道外口端，打开气卡放气，使精液流入集精杯。取下集精杯并迅速转移至精液处理室。

6.3精液品质检查

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6.3.1外观和精液量

用4～6层的无菌纱布或专用滤纸过滤精液至量筒或量杯中，测量体积并进行外观检测，精液呈乳（灰）白色或淡黄色，无异物，淡腥味。

6.3.2精子密度6.3.2.1方法

用血细胞计数法测定或用显微镜目测评定，也可用精子密度仪测定，单位为个/毫升，结果保留1位小数。

6.3.2.1要求

≥1.0×108个/毫升。

6.3.3精子活力6.3.3.1方法

用精子分析仪直接测定或用显微镜目测评定。6.3.3.2要求

≥70%。

7精液稀释

7.1稀释液配制

稀释液推荐配方及配制方法见附录A

配制好的稀释液置于4℃冰箱中备用，存放时间不宜超过7d。

7.2稀释液用量

稀释液用量按公式（1）计算，结果保留2位小数。

N=+2V………(1)

式中：

N－代表稀释液用量，单位为mL；V－代表射精量，单位为mL；

D1－代表原精密度，单位亿/毫升；

D2－代表稀释密度，单位为亿/毫升；

M－代表精子活力，单位为%；80%－离心回收率。

7.3方法

7.3.1离心去精清

将离心用稀释液37℃水浴1h，在无菌洁净的环境中把过滤的原精液移入离心管中，将离心用稀释液与原精液进行1～2倍稀释，用手轻轻缓慢摇匀使精液与稀释液充分混合后放入22℃恒温箱平衡10min，然后用1850rpm/min，离心15min，去掉上清液，保留离心管底部的精子沉淀物。

7.3.2稀释

将稀释液在22℃恒温箱中恒温1h或恢复至室温，再缓慢加入去除上清的离心管中轻轻摇匀，稀

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释精子至每毫升有效精子数约6.7×107个。

7.4精液分装与保存

在20℃~25℃条件下，按照输精剂量对稀释后的精液进行分装，稀释后的精液用8～10层纱布包裹，置于4℃恒温箱中存放，每间隔8h将精液轻摇，抽样检查精子活力。

7.5质量要求

7.5.1精子活力≥70%，

7.5.2有效精子数

≥6.7×107个/毫升。

7.5.3畸形率≤20%。

7.5.4菌落数

应符合NT/T3796的要求。

7.5.5输精时精子活力不应低于45%。

8档案管理

记录供精公驴号、精液活力、畸形率、鲜精保存时间等。具体内容见附录B，附录C。记录应完整、准确、真实。

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