NYT2678-2015 马铃薯6种病毒的检测 RT-PCR法.pdf

ICS65.020.01

B15

NY

中华人民共和国农业行业标准

NYIT2678-2015

马铃薯6种病毒的检测RT-PCR法

Detectionofthesixpotatoviruses-RT-PCRmethod

2015-05-01实施

2015-02-09发布

中华人民共和国农业部发布

NY/T2678一2015

前

本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由农业部种植业管理司提出并归口。

本标准起草单位：农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心（哈尔滨）、湖南农业大学园艺学

院、华中农业大学生命科学技术学院、福建农林大学。

本标准主要起草人：张威、白艳菊、李学湛、柳俊、詹家绥、聂碧华、胡新喜、何长征、高艳玲、范国权、

申宇、张抒、王晓丹、王文重、魏琪、邱彩玲、耿宏伟、董学志、万书明。

I

NY/T2678-2015

马铃薯6种病毒的检测RT-PCR法

1范围

本标准规定了马铃薯S病毒（PotatovirusS,PVS）、马铃薯X病毒（PotatovirusX,PVX）、马铃薯

M病毒（PotatovirusM,PVM）、马铃薯Y病毒（PotatovirusY,PVY）、马铃薯卷叶病毒（Potatoleaf

rollvirus,PLRV）和马铃薯A病毒（Potatoz时usA,PVA）的反转录聚合酶链式反应CRTPCR）分子

生物学检测方法（见附录A）。

本标准适用于马铃薯试管苗、原原种和田间马铃薯块茎、植株等组织中病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

本标准采用反转录－聚合酶链式反应（reverse-transcriptionpolymerasechainreaction,RTPCR)

方法检测马铃薯病毒。其原理是，将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增CPCR）相结合的

技术，RNA在反转录酶的作用下反转录成cDNA，再以cDNA为模板，在TaqDNA聚合酶的作用下进

行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的片段，从而达到鉴定病毒的目的。

4试剂和材料

以下所有试剂，除非另有规定仅使用分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水。

4.1TRizolRNA提取试剂

4.2三氯甲幌

4.3异丙醇

4.475%Z醇

量取无水乙醇75mL，加水定容至lOOmL。

4.5M-MLV反转录酶（200U/L)

4.6RNA酶抑制荆（40U/L)

4.7TaqDNA聚合酶（5U/L)

4.810xPCRbuffer{Mg2+f附）

4.9MgCl2(25mmol/L)

4.10dNTP混合物（各2.5mmol/L)

4.11焦碳酸二乙醋（DEPC）处理水

在lOOmL水中，加人焦碳酸二乙醋CDEPC)50µL，室温过夜，121℃高温灭菌20min，分装到