免疫检测技术.ppt

;免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。

具有高度精确、灵敏、特异的特点。

可用于免疫学的根底理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。;1、免疫疾病诊断

2、动物植物生理活动研究〔激素、维生素〕

3、物种及微生物鉴定

4、动物、植物性状的免疫标记

5、免疫增强药物和疫苗的研究

6、发病机理研究

7、分子生物学研究;第一节抗原抗体反响原理;一、体外抗原抗体反响的特点;网格理论——解释抗原抗体形成沉淀的机制;网格学说〔latticetheory〕;二、影响抗原抗体反响的因素;三、抗原抗体反响类型;第二节常见免疫检测方法;一、免疫沉淀反响

;絮状沉淀试验;环状沉淀试验;2.凝胶扩散沉淀;单向琼脂扩散试验;单向免疫扩散试验示意图;双向免疫扩散试验;;3.免疫电泳技术;血清免疫电泳;免疫电泳原理图解;火箭免疫电泳;

;二、凝集反响〔Agglutination〕;;妊娠免疫诊断试验;三、补体结合实验;抗原参加血清〔检测抗体〕;

免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反响。

免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提高了方法的灵敏度，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。;

;该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体

所进行的抗原抗体反响，尽管放射免疫技术需特殊

仪器设备且有一定的放射性危害，但由于其具有高

度的灵敏度〔pg〕和自动化检测等特点，因此在实

验研究和临床检测中仍被广泛应用。

主要用于激素、小分子药物、肿瘤标志物等

小分子化合物的定量分析。;放射免疫分析－根本原理;Ag*AbAg

标记抗原特异性抗体待测抗原;RIA法原理及标准曲线;

将荧光素〔异硫氰酸荧光素或罗丹明等〕标记抗体，

制成荧光抗体诊断试剂。

用荧光显微镜观察荧光的产生或荧光强度，以此判断

抗原的存在、定位和分布情况。

免疫荧光技术有直接法和间接法等。;免疫荧光技术——直接法;免疫荧光技术——间接法;免疫荧光染色显示细胞骨架;本???是抗原抗体反响的特异性与酶对底物的高效催

化活性相结合的免疫检测技术。酶标记的抗原或抗

体与待检标本中的相应成分特异性结合，根据酶作

用底物后的颜色变化，采用肉眼或酶标检测仪分

析、判断结果。

常用方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前

者用于检测可溶性抗原或抗体，后者常用于检测组

织中或细胞外表的抗原。;是在固相载体〔通常为聚苯乙烯反响板〕外表进行

的抗原抗体反响。

实验中常用的酶是辣根过氧化物酶〔HRP〕，底物

为二苯基联苯胺。;ELISA试验三个必要的试剂;;五种常见的检测方法;适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心;;几种标记/检测技术灵敏度的比较;几种标记/检测试剂的有效期比较;0;A.?将Ab吸附在固相载体外表;

B.参加酶标Ag和待测Ag，竞争结合Ab；对照只参加酶标Ag；

C.加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知Ag量。;

血清标本中的IgM包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM

参加特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合

抗人IgM抗体包被参加血清标本参加特异性抗原试剂参加针对特异性抗原的酶标抗体

加底物显色;捕获法;ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。

亲和素是一种糖蛋白，生物素为小分子化合物。

亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反响，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。

1个亲和素分子可与4个生物素分子结合。

因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可提高ELISA的敏感度。;ABS-ELISA法