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萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

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萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

姓名:曹蕾学号:

班级:生科0901

一、摘要:

1、在萌发小麦种子中提取淀粉酶，研究相关酶学性质，了解温度、PH值以及激

活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响，并且对酶的活力进行测定。

2、不同的温度、PH条件下和加激活剂或抑制剂情况下淀粉酶将淀粉水解的程度

不同，产物遇碘呈现不同的颜色，由此可知道酶活性的最适温度和最适PH，也可

知道激活剂能使酶的性增加，抑制剂能使酶的活性降低。对酶的活力进行测定时，

是测定产物麦芽糖的量，来表示酶的活力。

3、麦芽糖能将3、5—二硝基水杨酸还原成棕红色的氨基化合物(520nm处有最大

吸收峰)，其颜色深浅与麦芽糖浓度成正比，利用分光光度法测定棕红色的氨基

化合物吸光值，从而得到产物麦芽糖的量，来表示酶的活力[1]。

二、关键词:

小麦种子，淀粉酶，温度，PH值，激活剂，抑制剂，酶的活力麦芽糖

三、引言:

淀粉主要存在于植物中，并且几乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是在萌发后的

贮藏物质淀粉在它们的作用下降解禾谷类种子籽粒中淀粉酶活性更强。当种子萌发时,

为简单的化合物,供幼苗生长所需。正如我们所知，二十一世纪是生物信息时代，各种生物学领域研究层出不穷,对酶的研究是其中一个重要方面,目前对酶的研究已转入了后期，各种酶的生化性质也相继被研究出，酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成,只有在适当的温度、pH和离子强度下才具有生物活性,有些酶还需要辅酶或者辅因子[2]。通过此次实验研究，让我们进一步加深对淀粉酶的认识和学习，同时培养我们设计实验的基本思路，学会科学的实验组合，提出合理的实验方案,为以后研究其他种类的酶提供了研究方法和实验依据,也为我们以后更多的设计型实验作好

铺垫。

1(材料与方法

1.1材料

小麦(由东北农业大学生命学院生化教研室提供)1.2方法

1.2.1淀粉酶粗酶液的提取

称取2克萌发的小麦种子(芽长1cm左右)至研钵中加1g石英砂，研磨成匀浆，倒入25ml具塞刻度的试管中，用蒸馏水稀释至刻度线处，混匀后在室温(20?)下静置，每隔数分钟震荡一次，放置15—20分钟后，开始离心(4000r/min)10分钟，取上清液备用。

1.2.2温度对淀粉酶活性的影响

准备8支试管分别编号A、a、B、b、C、c、D、d，第一步分别在A、B、C、D管中加入PH=5.6的缓冲液柠檬酸1ml;第二步分别在A、B、C、D管中加入0.3%的NaCl溶液1ml;第三步分别在A、B、C、D管中加入0.1%的淀粉溶液2.5ml;第四步分别在a、b、c、d管中加入淀粉酶提取液1ml;第五步分别把A、a管放在4?冷冻箱中,把B、b管放在室温下,把C、c管放在40?水浴中,把D、d管放在沸水浴中,10min钟后把A管中的溶液倒入a管,把B管中的溶液倒入b管,把C管中的溶液倒入c管,把D管中的溶液倒入d管,再把a管放在4?冷冻箱中,把b管放在室温下,把c管放在40?水浴中,把d管放在沸水浴中,进行酶促反应10min;最后在a、b、c、d管中加入碘液各一滴,并观察颜色变化情况。经过整理，表格如下:

表1温度对淀粉酶活性的影响

AaBbCcDd管号

10101010缓冲液(pH=5.6)/mL

10101010淀粉溶液/mL

00000000淀粉酶提取液/mL

预保温/10min4?室温40?沸水浴

混合

A倒入aB倒入bC倒入cD倒入d

酶促反应(10min)4?室温40?沸水浴

碘液各3滴

1.2.3pH对淀粉酶活性的影响

准备三支试管分别编号?、?、?,第一步在?、?、?管中分别加入PH=3.0、PH=5.6、PH=9.6的缓冲液柠檬酸2ml;第二步分别在?、?、?管中加入0.3%的NaCl溶液1ml;第三步分别在?、?、?管中加入0.1%的淀粉溶液2.5ml;第四步分别在?、?、?管中加入淀粉酶提取液1ml;最后各管混匀，放在40?水浴中进行酶促反应10min,各加入碘液1滴，并观察颜色变化情况。经过整理，表格如下:

表2pH对淀粉酶活性的影响

123管号

2(ph5.6)2(ph8.0)缓冲液/ml2(ph3.0)

淀粉溶液/mL各2.5

淀粉酶提取液

各1

/mL

酶促反应

摇匀，40度水浴10min

(10min)

碘液各3滴

1.2.4激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响

准备三支试管分别编号?、?、?,第一步在?、?、?管中分别加入PH=