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009细菌的生物化学试验
009细菌的生物化学试验
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009细菌的生物化学试验
项目
细菌的生物化学试验
编写人
蒲燕
日期
2009-10-20
审核人
张明红
日期
2009-10-20
批准人
张明红
日期
2009-10-20
文件分发部门和/或个人
管理层
保管人
张明红
本规程自2009年12月01日起实施,每1年复审一次
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009细菌的生物化学试验全文共1页,当前为第1页。
009细菌的生物化学试验全文共1页,当前为第1页。
各种细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解能力不同,其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物,可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌,称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多,主要有以下几类。
1.碳水化合物的代谢试验
1.1糖(醇、苷)类发酵试验
009细菌的生物化学试验全文共2页,当前为第2页。1.1.1原理:不同种类细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,因而对各种糖(醇、苷)类的代谢能力也有所不同,即使能分解某种糖(醇、苷)类,其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖(醇、苷)降解后产酸或产酸产气的能力,可用以鉴定细菌种类。
1.1.2方法:在基础培养基中(如酚红肉汤基础培养基pH7.4)加入0.5~1.0%(w/v)的特定糖(醇、苷)类。所使用的糖(醇、苷)类有很多种,根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等,见表1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中,置35℃孵育箱内孵育数小时到两周(视方法及菌种而定)后,观察结果。若用微量发酵管,或要求培养时间较长时,应注意保持其周围的湿度,以免培养基干燥。
?1.1.3结果:能分解糖(醇、苷)产酸的细菌,培养基中的指示剂呈酸性反应(如酚红变为黄色),产气的细菌可在小倒管(Durham小管)中产生气泡,固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。
?1.1.4应用:糖(醇、苷)类发酵试验,是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验,不同细菌可发酵不同的糖(醇、苷)类,如沙门菌可发酵葡萄糖,但不能发酵乳糖,大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类,其发酵结果也不尽相同,如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖,但前者仅产酸,而后者则产酸、产气,故可利用此试验鉴别细菌。
??表1常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类
单糖四碳糖:赤藓糖;五碳糖:核糖、核酮糖、木糖、
009细菌的生物化学试验全文共2页,当前为第2页。
阿拉伯糖;六碳糖:葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖
双糖??蔗糖(葡萄糖+果糖)、?乳糖(葡萄糖+半乳糖)、
??麦芽糖(两分子葡萄糖)
三糖??棉子糖(葡萄糖+果糖+半乳糖)
多糖??菊糖(多分子果糖)、淀粉
醇类??侧金盏花醇、卫茅醇、甘露醇、山梨醇
非糖类?肌醇
009细菌的生物化学试验全文共3页,当前为第3页。1.2.葡萄糖代谢类型鉴别试验
1.2.1原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必须有分子氧参加的,称为氧化型;能进行无氧降解的为发酵型;不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖,而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵(O/F或Hugh-Leifson,HL)试验,可用于区别细菌的代谢类型。
1.2.2方法:挑取少许纯培养物(不要从选择性平板中挑取)接种2支HL培养管中,在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气(作为密封管),另一管不加(作为开放管)。置35℃孵箱孵育48h以上。
1.2.3结果:两管培养基均不产酸(颜色不变)为阴性;两管都产酸(变黄)为发酵型;加液体石蜡管不产酸,不加液体石蜡管产酸为氧化型。
1.2.4应用:主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型,非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌(发酵型)与微球菌(氧化型)。
009细菌的生物化学试验全文共3页,当前为第3页。
009细菌的生物化学试验全文共4页,当前为第4页。1.3.甲基红(MR)试验
1.3.1原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等,使培养基pH下降至4.5以下时,加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、醛、酮、气体和水),培养基pH在5.4以上,加入甲基红指示剂呈桔黄色。
1.?3.2方法:将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中,35℃
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