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009细菌的生物化学试验

009细菌的生物化学试验

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009细菌的生物化学试验

项目

细菌的生物化学试验

编写人

蒲燕

日期

2009-10-20

审核人

张明红

日期

2009-10-20

批准人

张明红

日期

2009-10-20

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张明红

本规程自2009年12月01日起实施，每1年复审一次

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009细菌的生物化学试验全文共1页，当前为第1页。

009细菌的生物化学试验全文共1页，当前为第1页。

各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。

1.碳水化合物的代谢试验

1.1糖（醇、苷）类发酵试验

009细菌的生物化学试验全文共2页，当前为第2页。1.1.1原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

1.1.2方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。

?1.1.3结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。

?1.1.4应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

??表1常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类

单糖四碳糖：赤藓糖;五碳糖：核糖、核酮糖、木糖、

009细菌的生物化学试验全文共2页，当前为第2页。

阿拉伯糖;六碳糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖

双糖??蔗糖（葡萄糖＋果糖）、?乳糖（葡萄糖＋半乳糖）、

??麦芽糖（两分子葡萄糖）

三糖??棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）

多糖??菊糖（多分子果糖）、淀粉

醇类??侧金盏花醇、卫茅醇、甘露醇、山梨醇

非糖类?肌醇

009细菌的生物化学试验全文共3页，当前为第3页。1.2．葡萄糖代谢类型鉴别试验

1.2.1原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。

1.2.2方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

1.2.3结果：两管培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。

1.2.4应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。

009细菌的生物化学试验全文共3页，当前为第3页。

009细菌的生物化学试验全文共4页，当前为第4页。1.3．甲基红（MR）试验

1.3.1原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。

1.?3.2方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃