基因工程基本操作程序.ppt

基因工程的基本操作程序;;基因工程的基本操作程序;一、目的基因的获取;（一）从基因文库中获取目的基因;基因组DNA文库;;①不能转录为信使RNA，不能

编码蛋白质。;;真核细胞的基因构造;;;基因体现的计算;基因组文库与部分基因文库的关系;基因组文库和部分基因文库的比较;概念辨析;基因组文库的构建模式图;2.基因文库的构建措施;（1）鸟枪法：;以目的基因转录成的信使RNA为模板，再反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，即cDNA，从而获得所需的基因。

;（3）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：;上述三种目的基因提取的措施有何优缺陷？;思索：

怎样从基因文库中得到所需要的基因？;（二）运用PCR技术扩增目的基因;;模板DNA;;;;;;①概念：PCR全称为_______________，是一项

在生物____复制___________的核酸合成技术。;过程：;⑥过程：;思索？;模板DNA

特异性引物

耐热DNA聚合酶

dNTPs

Mg2+;PCR的基本反应环节;TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus);PCR技术扩增与DNA复制的比较;;根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出对应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的构造基因的核苷酸序列，再通过化学措施，以单核苷酸为原料合成目的基因。;人工合成;从基因文库中获取

运用PCR技术扩增

运用化学措施人工合成;用一定的_________切割

质粒，使其出现一种切

口，露出____________。

用_____________切断目

的基因，使其产生_____

____________。;;2.基因体现载体的目的

（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传给下一代；

（2）使目的基因可以体现和发挥作用。;科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。

起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，成果抗虫基因在棉花体内没有体现。

然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，成果成长的植株，有了抗虫能力。;思索：作为基因工程体现载体，只需??有目的基因就可以完毕任务吗？为何？（P15）;（1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有助于基因的体现；;3.基因体现载体的构成：;;思索1：

体现载体为何一定要有启动子？;思索2：终止子的作用是什么？

终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。;①载体与体现载体的区别：两者均有标识基因和复制原点两部分DNA片段。体现载体在载体基础上增长了目的基因、启动子、终止子三部分构造。;基因工程技术路线;三、将目的基因导入受体细胞;（二）措施;1.将目的基因导入植物细胞;（1）农杆菌转化法;③转化过程:;基因枪法又称微弹轰击法，是运用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的体现载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并体现的措施。;（3）花粉通道法;胚珠;2.将目的基因导入动物细胞;（2）操作程序:;常使用方法：Ca2+处理;;四、目的基因的检测与鉴定;1、检测转基因生物染色体的DNA上与否插入了目的基因;基因探针：是一段带有检测标识，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。

基因探针通过度子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。;DNA分子杂交示意图;（二）鉴定（个体生物学水平）;;若不能体现，要对抗虫基因再进行修饰。;;提醒：

①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标识的DNA探针杂交；

②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用体现出的蛋白质注射动物进行免疫，产生对应的抗体，并提取出而来的。;归纳:基因工程的基本操作程序;为何要构建基因文库？直接从具有目的基因的生物体内提取不行吗？;运用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联络前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思绪，思索一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？;根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出农杆菌不能将目的基因不能导入单子叶植物的原因吗?若将一种抗病基因导入小麦中,理论上讲你应当怎样做?;4.β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要构成成分。当它的成分异常时，动物有也许患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基