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第3章基因工程
第1节重组DNA技术的基本工具导学案
【生命观念】阐明重组DNA技术所需的三种基本工具的作用。
【科学探究】进行DNA的粗提取与鉴定。
【社会责任】认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。
【教学重点】
1.重组DNA技术所需的三种基本工具的作用。
2.DNA的粗提取与鉴定。
【教学难点】
1.基因工程载体需要具备的条件。
2.DNA的粗提取与鉴定。
基因工程是指按照人们的愿望，通过______等技术，赋予生物新的__________，创造出更符合人们需要的新的__________和__________。从技术操作层面看，由于基因工程是在__________水平上进行设计和施工的，因此又叫作__________技术。
（1）原理：__________。（2）操作水平：_________。（3）操作环境：_________。
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
1.来源：主要是从__________中分离纯化出来的。
2.作用：识别双链DNA分子的特定__________，并且使每一条链中特定部位的_______
_____断开。
3.作用部位：__________，限制酶只切割两个核苷酸之间的__________。
4.限制酶的命名：用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如，一种限制酶是从大肠杆菌（Escherichiacoli）的R型菌株分离来的，就用字母EcoR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcoRI。
【思考】你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗？
5.识别序列：大多数限制酶的识别序列由_____核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由_____、_____或__________的核苷酸组成。
限制酶所识别的序列的特点是：呈现_______________，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为__________。
6.切割结果：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——_____末端和_____末端。
（1）实例1—EcoRⅠ限制酶：EcoRⅠ识别序列为__________，EcoRⅠ切割部位为_____之间的磷酸二酯键，形成__________。
（2）实例2——SmaⅠ限制酶：SmaⅠ识别序列为__________，SmaⅠ切割部位为_____之间的磷酸二酯键，形成__________。
【例1】写出下列限制酶切割形成的黏性末端
二、DNA连接酶——“分子缝合针”
1.作用：将两个__________连接起来，恢复被限制酶切开的__________。注意：不是连接氢键（氢键的形成不需要酶的催化）。
2.分类：
种类
E·coliDNA连接酶
T4DNA连接酶
来源
功能特性
相同点
【思考】DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？
种类
DNA聚合酶
DNA连接酶
不同点
作用实质
作用结果
模板
相同点
3.DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶、解旋酶的比较
种类
作用底物
作用部位
形成产物
DNA连接酶
DNA聚合酶
限制酶
解旋酶
三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
1.作用：将__________送入_____细胞。
2.种类：质粒、__________和_______________等。它们的来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差别。
最常用的载体——质粒：一种裸露的、结构_____、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有__________能力的_______________分子。
3.作为载体需具备的条件
（1）有一个至多个_______________，供____________________插入其中。
（2）能在细胞中进行__________或整合到__________上，随受体DNA同步_____。
（3）常有特殊的__________，便于重组DNA分子的筛选。如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过__________的。
【例2】选用下图载体将目的基因导入细菌中并将含有目的基因的细菌筛选出来。
（1）在培养细菌的培养基中添加抗生素B，则应该选择的限制酶为__________。
（2）在培养细菌的培养基中添加抗生素A，则应该选择的限制酶为_____。
【思考·讨论·重组DNA分子】
1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？
2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补
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