无细胞百白破联合疫苗多重竞争抑制鉴别法上网公示稿.pdfVIP

通则34**吸附无细胞百白破联合疫苗多重竞争抑制鉴别法

本法系采用抗原抗体竞争抑制法原理，使用多重液相芯片技术测定吸附无细胞百白破

疫苗有效组分百日咳毒素（PT）、丝状血凝素（FHA）、白喉类毒素（DT）和破伤风类毒素

（TT）等的生物测定法。

试剂（1）磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取氯化钠8.0g、氯化钾0.20g、磷酸氢二钠

1.44g、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解并稀释至1000mL，121℃灭菌15分钟。

（2）洗涤液（PBS-Tween20）量取聚山梨酯20（吐温20）0.5ml，加磷酸盐缓冲液

（pH7.4）稀释至1000ml。

（3）封闭液称取牛血清白蛋白0.5g，加磷酸盐缓冲液（pH7.4）溶解并稀释至100mL。

（4）稀释液称取牛血清白蛋白0.1g，加洗涤液（PBS-Tween20）溶解并稀释至100mL。

（5）抗体显色液选取藻红荧光蛋白标记对应种属的抗体，用稀释液稀释至适宜浓度。

稿

（6）不同编号磁珠。

（7）磁珠包被试剂盒。示

（8）PT、FHA、DT、TT纯化蛋白。

检测磁珠的制备用磁珠包被试剂盒，分别在不同编号的磁珠上包被适宜浓度的PT、

公

FHA、DT、TT纯化蛋白。网

阳性对照的制备取吸附无细胞百白破联合疫苗参考品（鉴别试验用），用稀释液稀释

至低值阳性对照（PT、FHA0.1μg/ml，DT、TT0.1Lf/mL），和高值阳性对照（PT、FHA

上

1.0μg/mL，DT、TT1.0Lf/mL）。

阴性对照的制备用稀释液做阴性对照。

百白破多抗血清的制备取人源百日咳抗血清国家参考品或鼠源百日咳抗血清国家参

考品，用稀释液稀释至适宜的浓度。

供试品溶液的制备取疫苗供试品适量，加枸橼酸钠或其他适宜的试剂进行疫苗解析

附处理。

测定法取制备好的检测磁珠，混合后用封闭液稀释，以100μL/孔加至96孔平底板，

每孔内每种抗原检测磁珠应为500-1000颗，以封闭磁珠及平底板，37℃震荡孵育1小时，

用洗涤液（PBS-Tween20）洗板3次后拍干；分别取供试品溶液上清液、阳性对照和阴性对

照100μL加入96孔稀释板，取稀释至适宜浓度的百白破多抗血清100μL加入96孔稀释

板对应孔混合，37℃恒温箱震荡孵育1小时；将96孔稀释板中液体全部转移至96孔平底

板，另加一孔稀释液作空白对照，37℃恒温箱震荡孵育1小时，用洗涤液（PBS-Tween20）

洗板3次，拍干；以100μL/孔加入抗体显色液，37℃恒温箱震荡孵育0.5小时，用洗涤

液（PBS-Tween20）洗板3次，拍干；以50μL/孔加入洗涤液（PBS-Tween20）重悬磁珠，使

用多重悬浮列阵荧光分析系统测定荧光值，按磁珠编号区分不同抗原结果。

适用性要求各组分阳性对照荧光值应低于相应组分阴性对照荧光值，各组分高值阳性

对照荧光值应低于相应组分低值阳性对照荧光值。

结果判定供试品溶液各组分荧光值低于相应组分低值阳性对照荧光值者为阳性。

稿

示

公

网

上

起草单位：中国食品药品检定研究院联系电话：010