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MS—275体外诱导膀胱癌细胞凋亡机制分析及探析

1MS275体外诱导膀胱癌细胞凋亡机制分析及探析MS275体外诱导膀胱癌细胞凋亡机制分析及探析[摘要]目的研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂MS-275对膀胱癌T24细胞的诱导凋亡作用，并初步探讨其分子机制。

方法用MTT法检测MS-275对T24细胞的生长抑制作用，并观察其有效作用浓度，采用荧光显微镜及原位末端标记（TUNEL）法观察和检测MS-275对T24细胞的诱导凋亡作用，采用流式细胞仪（FCM）检测Bcl-2和Bax在细胞内表达的动态变化。

结果MS-275抑制T24细胞的半抑制浓度（IC50）为（5.21plusmn;0.61）mu;mol/L。

4.0mu;mol/L的MS-275处理T24细胞后可观察到典型的凋亡形态学变化，且随着作用时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高，同时引起Bcl-2及Bax的表达率分别下调和上调。

结论HDAC抑制剂具有体外诱导膀胱癌细胞凋亡的作用，其作用机制涉及Bcl-2及Bax表达的动态改变。

[关键词]膀胱癌；组蛋白去乙酰化酶；细胞凋亡[中图分类号]R737.14[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2012）10（a）-0033-03膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一，每年有350000例以上的新发病例，并且有145000人死于此病[1]。

其生物学行为呈多样性，而容易复发是其重要生物学特性。

目前对其发生、2复发、浸润及转移的机制尚未完全明了，大部分膀胱癌在确诊时是表浅性的，经过局部手术治疗后复发率为50%～70%，进展率为15%～30%。

现有的传统抗肿瘤药物治疗尚有一定的局限性，从新的角度寻求有效的抗肿瘤药物有望取得突破性进展。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeactylaseinhibitors，HDAC抑制剂）是一类通过抑制组蛋白去乙酰化酶（histonedeacetylase，HDAC）而改变染色质结构，在转录水平进行基因表达调控的化合物，依其化学结构可分为六类，而MS-275是苯酰胺类HDAC抑制剂中最具活性的一种化合物，其显示出对一些血液系统肿瘤[2]和实体肿瘤[3]有较强的抗肿瘤活性。

本实验将探讨MS-275对膀胱癌细胞的诱导凋亡作用及其机制。

1材料与方法1.1细胞培养人膀胱癌T24细胞来源于中国科学院上海生物细胞研究所，实验时取对数生长期的细胞，在含10%小牛血清的细胞培养基（DMEM）培养液中培养，在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下生长，0.25%胰蛋白酶消化传代。

1.2MTT实验T24细胞以5times;104/mL、100mu;L/孔，接种于96孔培养板，培养24h后，分别加入浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mu;mol/L的MS-275作为5个实验组，阴性对照组不加MS-275，空白对照组为单纯DMEM培养液，每组各设5个复孔。

继续培养48h，每孔加入5g/L的MTT溶液10mu;L，再培养4h，3吸出孔内培养液，每孔加100mu;L二甲基亚砜（DMSO），酶标仪测定吸光度，选择492nm波长，用空白对照组调零，计算细胞生长抑制率（%）=（1-实验组吸光度/对照组吸光度）times;100%。

以细胞生长抑制率与药物浓度的对数作图，在图上求出MS-275对T24细胞的半抑制浓度（IC50）值。

选取接近于IC50值的浓度用于下一步实验。

1.3荧光显微镜观察凋亡的形态学变化将T24细胞以1times;105/孔接种于6孔培养板，观察细胞贴壁且生长良好后，加入浓度为4.0mu;mol/L的MS-275作为实验组，非药物处理组作为对照组，继续分别培养12、24、48h，细胞经胰蛋白酶消化收集后，以磷酸盐缓冲液（PBS）调整细胞密度为1times;106/mL，制成单细胞悬液，取95mu;L细胞悬液，加人100mu;g/ml的吖啶橙染液5mu;L混匀，取10mu;L混合液于载玻片上，加盖玻片后于荧光显微镜（OlympusBX60）下（515nm激发光）观察细胞形态学变化并摄片。

毕业论文1.4原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡4mu;mol/