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纸色谱法实验报告

篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告

前言

纸层析法纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一

种分离技术。本世纪初俄国植物学家m.Tswett发现并使用

这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色

素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领

域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。

固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的

有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，

甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适

宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离

不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，

用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离

（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分

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点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比

色法等）。

纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、

鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分

的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱

基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工

具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中

滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流

动相。

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它

用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如gc、hpLc

应用普遍。在

做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，

将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，

四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素

带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素

主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在

层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散

地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上

留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的

色素分离。

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图1叶绿素的分离

氨基酸氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、

医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展

逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越

来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世

界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。

我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61％，

在饮料工业占30％，医药、日用化工、农业、冶金、环保、

轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。

氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用：

(1)在食品行业的应用

(2)在医药工业的应用

(3)在饲料添加剂行业的应用

(4)在化妆品行业的应用

(5)在农业上的应用

(6)在其他行业的应用

氨基酸工业还有着广阔的发展前景：

(1)传统的氨基酸生产方法

(2)运用基因工程手段生产氨基酸

(3)大力发展药用中间体,具体为：

①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体

②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料

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③生产高附加值的非天然氨基酸

一、实验目的

(1)掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作

技术（包括点样、平衡、展层、显色）。

(2)学习未知样品的氨基酸成分（水解、层析及鉴定）

分析的方法。