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RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca109细胞株增殖影响的实验研究

RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca109细胞株增殖影响的实验研究作者：

郑学芝，刘桂莲，李丽，孙卫，念红，胡静,蔡子微【摘要】目的筛选NS基因特异性siRNA阳性细胞克隆，研究NS基因特异性RNA干扰对Eca109细胞株体外增殖能力的影响。

方法用脂质体法将NS特异性siRNA表达载体转染Eca109细胞，Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定阳性克隆；MTT法检测各组细胞的生长增殖情况，RTPCR方法检测NS基因表达量的变化情况。

结果与对照组比较，silencer组肿瘤细胞趋于分化，细胞增殖抑制率超过80%(Plt;0.01)，差异具有显著性；NS基因表达量下降。

结论NS基因特异性RNA干扰抑制人食管癌Eca109细胞株体外增殖，使NS基因表达量下降。

【关键词】Nucleostemin（NS）;RNA干扰；食管癌；基因表达；细胞增殖Abstract：

ObjectiveToscreenNSgenespecificpositivecellclones,andinvestigatetheeffectofhumanesophaguscancerEca109cellsproliferationinvitrobyNSgenespecificRNAinterference.MethodsTheNSsiRNAexpressionvectorwastransfectedintohumanesophaguscancerEca109cellsusingLIPOFECTAMINETM2000Reagent,andpositivecloneswereexaminedbyPCRafterstabletransfectansscreeningwithZeocin;detectedthecellproliferationbyMTTassayandthelevelsofNSgeneexpressionbyRTPCR.ResultsComparedwiththetwocontrolgroups,thesilencergroupcellswerenearerdifferetiation,theproliferationinhibitoryratewashigherthan80%(Plt;0.01)；thelevelofNSgeneexpressionreduced.ConclusionTheNSgenespecificRNAicansignificantlyinhibithumanesophaguscancerEca109cellsproliferationinvitroandreducethelevelofNSgeneexpression.Keywords：

Nucleostemin（NS）;RNAinterference;Esophaguscancer；Geneexpression;Cellproliferation0引言NS基因是美国国立卫生研究院的学者MckayandTsai2002年新发现的一种蛋白质核因子［1］，该基因在干细胞及人类的数种肿瘤细胞中表达丰度很高，但在分化的成体组织中，该基因却不表达。

二位学者提出干细胞与癌细胞均由相同的蛋白质－NS来决定其细胞自我复制的能力，NS可能是干细胞和肿瘤细胞通过G2/S检验点的特异性调控因子。

本文将以人食管癌Eca109细胞株为实验材料探讨NS基因特异性RNA干扰对食管癌Eca109细胞株体外增殖能力的影响。

1材料和方法1.1材料人食管癌Eca109细胞购于上海细胞所；1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶为