海洋土壤中微生物的分离与纯化.pptVIP

海洋环境中微生物的

分离纯化;一、实验目的和内容;2.抑菌活性测定

对于一株新分离纯化出来的菌，可从各方面的活性来评价其价值：如分解淀粉、分解蛋白质的活性，抑菌、抗肿瘤、杀虫等活性。本实验将对分离的微生物进行抑菌活性的测定对分离出来的菌株进行初步的功能测试。

将供试菌（金黄色葡萄球菌）先接种在培养基表面，再在培养基上放置圆形滤纸片，并在纸上滴加微生物的发酵液，发酵液便向周围扩散。如果样液中含有抑制供试菌的物质（小分子或蛋白质），则供试菌生长受抑制，在滤纸片的周围形成透明圈即抑菌圈，抑菌活性越高，抑菌圈越大。;四、实验步骤;（三）涂布平板

取三种培养基平板各3个，分别标记好10-2、10-3、10-4，用移液枪分别取10-2、10-3、10-4土壤稀释液各0.1mL，对号放入相应稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒器在培养基表面轻轻地涂??均匀，室温下静置5~10min，培养基充分吸收菌液，包扎，培养。;（五）菌种的抑菌活性测定

1.将分离到的菌株接种到相应的液体培养基中发酵培养：细菌发酵24h，放线菌发酵7~14天，霉菌发酵7天，直接取发酵液（样品）。

2.将普通滤纸用打孔器打成0.5cm直径的圆片，装在试管中密封灭菌（121℃，20min）。

3.倒LB平板，吹干后，取100ul指示菌（本实验用金黄色葡萄球菌）过夜培养物，均匀涂布于培养基表面，吹干。

4.用无菌镊子夹起滤纸片放入样品（微生物发酵液）中浸透，夹出时在容器边缘停靠片刻，滤掉多余的药液，把滤纸片放在平板中凝好的培养基上，用镊子稍用力按一下，使之与培养基充分紧贴；以灭菌水浸湿的滤纸片做空白对照。

5.将平板于28℃倒置培养24h后观察，用直尺或游标卡尺测量抑菌圈的大小。;五、实验结果与讨论