现代食品微生物学--课件-第八章-微生物的分类与鉴定.pptxVIP

第八章微生物的分类与鉴定;

第一节微生物在生物界的地位

第二节微生物的分类与命名

第三节微生物分类鉴定的方法

重点与难点、课程思政点、复习思考题

;图8-1生物界级学说发展的示意图（阴影部分表示微生物）;20世纪70年代以前，生物类群间的亲缘关系判断的主要根据：形态结构、生理生化、行为习性等表型特征，以及少量的化石资料来判断。

;rRNA作为分子计时器的优点：;用rRNA分子计时器进行微生物进化关系的分析;二、三域学说及其发展;三域生物的16SrRNA的比较

（图中粗线表示细菌和古菌的差异）;利用16SrRNA建立分子进化谱系树

的美国科学家伍斯(C.RWoese);二、三域学说及其发展;;揭示微生物的多样性及其亲缘关系，建立自然分类系统。;界;;;BacillussubtilisAS1.398;;;;二、微生物的分类系统;;;第三节微生物分类鉴定的方法;一、传统分类;;;;;;数值分类：是借助计算机技术对被分类菌株按大量表型性状的相似程度进行统计、归类，将菌株间所有的分类性状进行两两对比，求其相似系数而进行分类。

在比较不同的菌株时，都要采用一套共同的可比特征进行实验，包括形态、生理、生化、生态和血清学反应等实验，一般要求选择不少于50个实验特征，否则影响分类结果的可信度。

收集实验中获得的被分类菌株有关分类性状的大量数据，采用计算机运算处理数据，

根据相似系数大小进行检索，相似系数小者为同属，相似系数大者为同种。;三、化学分类;四、分子分类;由于原核生物细胞中的16SrDNA和真核生物细胞中的18SrDNA的碱基序列都十分保守，不受微生物所处环境条件变化的影响，故可通过分析比较微生物种之间16SrDNA或18SrDNA的同源性，揭示细菌或真菌的种属亲缘关系。

16SrDNA：是细菌16SrRNA的编码基因(即rRNA是rDNA的转录产物)，长约1.5kb。

利用细菌的通用引物扩增rDNA基因，产物序列测定后

，输入NCBI(美国国立生物技术信息中心)数据库中对其进行同源性分析，通常情况下当16SrDNA序列同源性大于99%时，则可认为它们属于同一个种。

其鉴定原理及鉴定步骤详见第十四章第四节食物中毒病原菌的检测技术。;待鉴定菌株纯种培养液→4℃离心→菌泥(弃上清液)→破细胞壁(G+菌用溶菌酶)→以细菌基因组DNA快速抽提试剂盒提取基因组DNA→细菌总DNA→用细菌16SrDNA通用特异性引物进行PCR扩增→16SrDNA的PCR产物DNA测序→在NCBI数据库中进行BLAST同源性序列比对分析→与已知标准菌株序列比对相似性(同一性)为大于99%→鉴定未知菌株即为已知标准菌株的种。;转录间隔区序列：是指位于rDNA操纵子序列中位于编码不同沉降系数rRNA之间的序列。

该序列通常比rRNA序列显示出更多的变异，可广泛用于生物进化谱系分析和/或鉴定种和菌株。可以采用种、属特异性ITS片段扩增，探针杂交或ITS序列分析。;管家基因：也称看家基因，是细胞在各种不同环境中都必须稳定表达的一类基因，其基因的产物是维持细胞基本生命活动所必需的。

由于其序列的高度保守性和持续表达性，管家基因常被用于微生物的分类分析，能有效提高不同菌种之间鉴定的准确性

;(1)三域学说内容；(2)微生物的双名法；(3)经典(传统)的微生物分类鉴定方法；(4)16SrDNA序列同源性分析技术。;1.五界分类系统是谁提出的？其内容是什么？有何特点？

2．三域学说是谁提出的？其内容是什么？这一学说的三个域是如何进化而来的？

3.微生物的双名法的构成是什么？其命名规则是什么？如何正确书写微生物学名？

4.菌种与菌株有何区别？举例说明之。

5.微生物分类鉴定工作中有哪些经典方法？其内容是什么？

6.微生物分类鉴定工作中有哪些新技术？实验室较常用哪种分子生物学技术？