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小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定

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R394A1672-5085（2013）05-0139-01

【摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。

【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠

巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。

1材料与方法

1.1实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。

1.2主要试剂6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。

1.3主要仪器Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。

1.4材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。

1.5小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。

吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%

吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞

1.6细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。

2实验结果

2.1台盼蓝牛鲍计数板法活细胞排斥染料不被着色，死亡细胞染料渗入细胞，细胞呈蓝色，正常情况下，小鼠腹腔巨噬细胞成活率活细胞的比例应不少于98%。

2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定结果见下表。平均吞噬百分率为38.04%，平均吞噬指数为0.39。

组别吞噬巨噬细胞数被吞噬鸡红细胞数吞噬率（%）吞噬指数670.40630.40350.37500.38

在油镜下（10*100观察可见鸡红细胞经瑞氏染色后呈粉红色，有核，而巨噬细胞体积较大呈蓝色，巨噬细胞吞噬鸡红细胞呈现不同的阶段，有的鸡红细胞紧贴在巨噬细胞表面，有的部分已吞入，有的巨噬细胞已吞入1个或多个红细胞。见图1

图1油镜下的（10×100）小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞形态

3讨论

本实验选择来源容易且便宜的小鼠，提取其腹腔巨噬细胞。从大量的文献可知腹腔巨噬细胞的提取方法大致都是灌洗腹腔后吸出含有巨噬细胞的灌溉洗液[2]。本实验采用了6%的淀粉肉汤刺激小鼠腹腔产生大量的巨噬细胞，且获得的巨噬细胞成活率在98%以上，与文献报道一致。巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验常用于免疫增强药物活性的评价，本实验获得小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数均与其他文献的报道基本一致[3],建立了一种简易而且经济的小鼠腹腔巨噬细胞相关研究，提供了切实可行的实验方法。

Reference

[1]徐远义，黄允宁，常越，等.多抗甲素诱导小鼠腹腔巨噬细胞对癌细胞杀伤增强机制的研究[J]免疫学杂志，2006,22(4)：396-398.

[2]张均田.现代药理实验方法[M].北京;北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998,729-740.

[3]伊美珍，李世普，等.小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定[J].武汉大学学报（医学版），2006,27（2）：203-205.

[4]张华，曲震寰，等.小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与吞噬功能测定[J]黑龙江医药科学，2007，30（5）:9-10.

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-全文完-