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大豆蛋白的功能性测定

大豆蛋白的功能性测定

专业：生物工程班级：08一班学号：060508131姓名：戴璐成绩：

摘要：利用考马斯亮蓝G250测定样品中蛋白含量为百分之十左右远不及样品包装上所说

的82%的含量；紫外分光光度计测定大豆蛋白紫外吸收特征，其紫外光谱显示含较多无法除

尽的杂质，荧光光度计观察其荧光效应，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量

关键词：大豆蛋白蛋白含量测定紫外吸收电泳功能性

1.概述蛋白质是组成人体的重要物质。是人体生命活动的物质基础，是食品的第一大营

养素。大豆是重要的粮油兼用作物，它富含蛋白质、脂肪，是一种营养平衡的食物。其籽粒

含蛋白质一般为40%左右，比一般谷物高2-4被，也比牛奶、鸡蛋和瘦猪肉的蛋白质含量高。

大豆是豆科植物中最有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。另

外，大豆蛋白不含淀粉，氨基酸也组成比较平衡。所以，目前许多蛋白质营养品都是用的大

豆蛋白。

2.材料与方法

1.考马斯亮蓝G250测定蛋白含量

【材料】标准蛋白液，样品蛋白，722型分光光度计

【方法】

1.标准曲线的制作

取7支干净试管，按表一进行编号并加入试管

混匀，室温静置3分钟，以第1管委空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸

光度为纵坐标，各标准浓度作为横坐标作图的标准曲线

2.样液的测定

另一支干净试管，加入样液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，

于波长595nm处比色，读取吸光度，由样液的吸光度查标准曲线即可求出蛋白含量

2.大豆蛋白质的紫外吸收特征

【材料】标准蛋白液，样品蛋白，UV-9100型紫外分光光度计

【方法】将大豆蛋白溶于1mol/LPH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成2.0mg/mL的

蛋白质溶液，以对应的Tris-HCl作参比，做紫外-可见扫描，速度10nm/s，范围200-400nm

之间

3.大豆蛋白质的疏水性及荧光光谱

【材料】标准蛋白液，样品蛋白，日本岛津RF-5310PC型荧光光度计，离心机，100mL

烧杯2个，玻璃棒1个

【方法】将大豆蛋白溶于1mol/LPH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成0.5，1.0，

2.0mg/mL的蛋白质溶液，3000r/min离心10min，以以相对应的Tris-HCl作参比，采用日

本岛津RF-5310PC型荧光光度计进行荧光测定，激发波长280nm,发射波长300-800nm之间

4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

【材料】直流稳压电泳仪，垂直平板电泳槽

⑴分离胶缓冲液1.5mol/LTris-HCl(pH8.8)

1

大豆蛋白的功能性测定

取18.15gTris,加80ml重蒸水，用1mol/L的HCL调pH至8.8，用重蒸水稀释至最终

体积为100ml，4℃冰箱保存。

⑵浓缩胶缓冲液0.5mol/LTris-HCl(pH6.8)

取6gTris,用1mol/L的HCL调pH至6.8，用重蒸水稀释至最终体积为100ml，4℃

冰箱保存。

⑶10%(w/v)SDS

⑷凝胶储备液：29.2g丙烯酰胺，0.8g亚甲基双丙烯酰胺，加重蒸水至100ml。外包

锡纸，4℃冰箱保存，30天内使用。

⑸两类样品缓冲液

A2倍还原缓冲液：0.5mol/LTris-HCl(pH6.8)2.5ml,甘油2.0ml，质量浓度10%SDS

4.0ml,质量浓度0.1%溴酚蓝0.5ml，β-巯基乙醇1.0ml

B2倍非还原缓冲液：重蒸水1.0ml,0.5mol/LTris-HCl(pH6.8)2.