星点设计-效应面优化牛大力多糖提取工艺.docx

?

?

星点设计

效应面优化牛大力多糖提取工艺

?

?

陈勇谢臻巫繁菁等

摘要：利用星点设计-效应面法对牛大力多糖的提取工艺进行优化。以提取温度、提取时间和料液比为自变量，多糖提取率为因变量，通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合，用星点设计-效应面法选取最佳工艺。试验结果表明最佳工艺条件为89.3℃，料液比1∶32（g/mL），提取106min，在此条件下测得多糖含量为558.5mg/g，与预测值554.6mg/g较接近。

关键词：星点设计；效应面；牛大力；多糖

中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）22-5507-04

牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤（MillettiasliaopeciosaChamp.）的根[1]，俗称山莲藕、血藤、九龙串珠、牛古大力、大力薯[2]。性味甘平，具有补虚润肺、强筋活络的功效，临床证明对腰肌劳损、风湿性关节炎、肺结核、慢性支气管炎等有一定疗效[3]。牛大力的主要化学成分为苯丙素类、三萜类化合物、植物甾醇、多糖等[4]。现代药理试验研究结果表明，牛大力具有镇咳平喘、抗肝纤维化作用，其多糖成分还具有调节免疫功能作用[5-9]。本试验采用加热回流提取，以多糖提取率为指标，采用星点设计-效应面法优化了牛大力的提取工艺，确定了最佳提取工艺，为充分利用牛大力资源，及其质量控制提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料与仪器

牛大力药材购于玉林中药材市场，部分采自广西靖西县，并经广西中医药大学朱意麟老师鉴定为豆科植物美丽崖豆藤的根。

Agilent8453型紫外-可见分光光度计（美国安捷伦科技有限公司）、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯），水为去离子水，其余试剂均为分析纯。

1.2试验方法

1.2.1牛大力多糖含量测定

1）标准品溶液制备。精密称取干燥至衡重的葡萄糖粉末12.57mg，置于100mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，配得葡萄糖标准溶液。

2）供试品溶液制备。取牛大力药材粉末0.5g，置于250mL的锥形瓶中，加入去离子水32mL，89.3℃加热回流106min，滤过，吸取滤液5mL，加入无水乙醇20mL不断搅拌使之含醇量达到80%，得到均匀乳白色沉淀，放入冰箱静置过夜。将沉淀用无水乙醇冲洗至析晶漏斗上，抽滤，弃去乙醇液。用沸水将漏斗上的多糖结晶溶解抽滤至50mL容量瓶中，定容。

3）最大吸收波长。取葡萄糖标准品适量置于100mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，配得葡萄糖标准溶液。在冰水浴中加入0.05%硫酸-蒽酮4.0mL，静置10min，取出摇匀，沸水浴10min后取出，冷却，室温放置30min后，以相应试剂作空白，在400～800nm测定光谱图，葡萄糖标准品紫外可见光谱图见图1，同法操作，牛大力供试品溶液紫外可见光谱图见图2，全波长扫描，葡萄糖标准品溶液与牛大力供试品溶液的最大吸收波长均为628nm，所以选择此波长为测定波长。

4）标准曲线测定。取上述标准品溶液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL至具塞试管中并加去离子水至1.0mL。在冰水浴中加入0.05%硫酸-蒽酮4.0mL，静置10min，取出摇匀，沸水浴10min后取出，冷却，室温放置30min，在628nm处测定其吸光度，以1.0mL去离子水为空白，记录各吸光度并绘制标准曲线。

1.2.2单因素试验多糖溶于水而不溶于高浓度乙醇，因此先用80%乙醇去除影响多糖含量的物质。再用水加热回流提取多糖，考察提取温度（40、50、60、70、80、90、100℃）、提取时间（20、40、60、80、100、120、140min）、料液比（g/mL，下同）（1∶16、1∶20、1∶24、1∶28、1∶32、1∶36、1∶40）3个因素对多糖提取率的影响。

1.2.3星点试验设计因提取次数为非连续变量，不能进行回归处理，固定提取1次。根据星点试验设计的原理，结合单因素考察结果，以提取温度、提取时间和料液比作为影响牛大力多糖含量的提取因素。每个因素设有5水平，因素与水平见表1。

2结果与分析

2.1标准曲线

标准曲线见图3。由图3可知，葡萄糖标准品在0.007542～0.020112mg/mL间呈线性关系，计算回归方程为y=32.83x+0.0383，r=0.9993。

2.2指标测定结果

2.2.1精密度试验结果取同一标准品连续测定6次，吸光度平均值为0.60081，RSD为0.46%，取同一供试品溶液连续测定6次，吸光度平均值为0.6008，RSD为0.46%，表明本法精密度良好，。

2.2.2稳定性试验结果取供试品溶液1份，每隔10min测定吸