植物细胞培养课件.pptxVIP

;什么是植物细胞培养？;几个重要概念（一）：;（3）外植体：指植物组织培养中用来进行离体无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等。

（4）继代培养：指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养。;11.1植物细胞培养的意义;★有些产物的唯一来源只能是植物，而许多有价值的植物只能生长在某一特定的地理区域，且受到很多自然条件的限制和影响，尤其是有些植物从种植到收获要花几年时间，很难满足需要。采用大规模植物细胞培养技术就可以直接生产这些产物。

;例如：

作为药物和染料的紫草宁就是典型的通过大规模植物细胞培养生产的产品，通过大规模培养紫草细胞短时间内就可大量生产紫草宁。;与整株植物栽培相比，细胞培养技术的优点包括：;11.2植物细胞培养发展史;●50年代，Taleche和Nickell确立了植物细胞能够成功地生长于悬浮培养物中。

●1956年，Nickell和Routin首次申请用植物组织培养细胞生产化学物质的专利。从此以后，植物组织和细胞培养进入实质应用研究开发阶段。;●至今植物细胞培养已着手研究的植物多达100余种，进入中试开发或工业生产规模的有人参、紫草、红豆杉、毛地黄、烟草等。

●当前植物细胞培养的应用领域主要涉及以下三个方面：（1）有用代谢物质的生产；（2）珍贵植物和名贵花卉等种苗的快速繁殖；（3）进行植物细胞遗传、生理、生化和病毒方面的研究。;11.3植物细胞培养基;11.3.1植物细胞培养基的组成;★无机盐类：提供植物细胞生长所需的“大量元素”和“微量元素”，25mmol/l左右

硝酸盐可单独作为植物细胞培养的无机氮源，但实际应用中，加入一些铵盐对细胞的生长是有利的。

培养基中必须添加钾元素

微量元素主要包括碘、硼、锰、锌、钼、铜、钴、铁等;★碳源和能源：蔗糖和葡萄糖

通常在培养基中增加蔗糖的含量，可增加培养细胞的次生代谢产物量。

★维生素：植物细胞的生长都需要硫胺素。可在植物细胞培养基中加入烟酸、吡哆醇、泛酸、生物素和叶酸等。;★植物生长激素：包括了植物生长素、细胞激动素、赤霉素和脱落酸等四大类。

植物生长素具有促进细胞分裂的作用，并可促使根的形成和生长；

细胞激动素对芽的诱导具有重要作用；

赤霉素通常用于原生细胞形成后的植株再生。;★有机氮源：蛋白质水解物、谷氨酰胺或氨基酸混合物等。

有机氮源对细胞初级培养的早期生长阶段有利。

加入L-谷氨酰胺(2~8mmol/l)或其他氨基酸混合物对植物细胞的培养很有好处。;★有机酸：加入丙酮酸，或者柠檬酸、苹果酸和琥珀酸等三羧酸循环的中间产物，能够保证植物细胞在以铵盐作为单一氮源的培养基上生长，并且使细胞对钾盐的耐受能力至少提高到10mmol/l。此外，这些有机酸还能提高低密度接种的细胞和原生质体的生长。

★复合物质：酵母抽提液、麦芽抽提液、椰子汁和水果汁等复合物质通常可作为细胞的生长剂。;目前，应用最广的基础培养基主要有MS(Murashige和Skoog)、B5（Gamborg等）、E1以及N6培养基（Philips和Collins）。;11.3.2植物细胞培养基的制备;11.4植物细胞培养方法;■单倍体细胞培养：用花药在人工培养基上进行培养

■原生质体培养：植物的体细胞经过纤维素酶处进后可去掉细胞壁，获得的去壁细胞称为原生质体。该原生质体在良好的无菌培养基中可以生长、分裂，最终可长成植株。

■固体培养：凝固剂几乎都使用琼脂，6~10%

■液体培养：分为静止培养和振荡培养两类。静止培养不需要任何设备，适合于某些原生质体的培养；振荡培养需要摇床或转床等设备使培养物和培养基保持充分混和以利于气体交换。;■悬浮培养：一种使组织培养物分离成单细胞并不断扩增的方法

愈伤组织经过悬浮培养可以产生比较纯一的单细胞。用于悬浮培养的愈伤组织应该是易碎的。

■固定化培养：应用最广泛的、能够保持细胞活性的固定化方法是将细胞包埋于海藻酸盐或卡拉胶中。

;11.5植物细胞的大规模培养技术;11.5.1植物细胞的大规模悬浮培养;（1）悬浮培养中的植物细胞的特性;●植物细胞的纤维素细胞壁很容易被剪切力高的传统搅拌式微生物反应器损伤。

●与微生物细胞相比，植物细胞生长速度慢，操作周期长，分批培养一般需要2~3周，半连续或连续培养时间一般长达2~3个月。同时植物细胞培养基成分丰富而复杂，很适合真菌等生长。因此，对于植物细胞培养，保持无菌有一定难度但是相当重要。;（2）植物细胞培养液的流变特性;（3）植物细胞培养过程中的气体传递与影响;●CO2的影响：对植物细胞培养来说