《生物化学》单元十一 生物化学实验 教学课件.pptxVIP

生物化学（第二版）;生物化学实验;;;01;分光光度计是生化实验室常用分析仪器，适用于临床检验、环保监测、质量控制等部门。分光光度计的分光元件分为棱镜式和光栅式两种，多采用光栅分光。

【实验目的】

通过实验使学生掌握分光光度计的工作原理和仪器正确使用要点，为后续实验课生化项目的定量分析奠定基础。

【仪器工作原理】

溶液中的物质在光照射激发下，产生对光吸收的效应，物质对光的吸收具有选择性，不同的物质都具有各自的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，符合朗伯-比耳定律。

【仪器的结构】

分光光度计的基本结构通常包括光源、单色器、比色杯（吸收池）、检测器、显示器等部分。下面以722型光栅分光光度计为例进行介绍。722型光栅分光光度计由光源、单色器、试样室（比色杯）、光电管、线性运算放大器、对数运算放大器、数字显示器等部件组成。其基本结构和外观如实验图1-1、实验图1-2所示。;【仪器主要部件】;【仪器的安装使用】

（1）使用仪器前，首先要了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操作旋钮之功能；对仪器的安全性进行检查，包括电源线接线牢固、接地良好、各个调节旋钮的起始位置正确、放大器暗盒的干燥筒（或干燥器）的硅胶是否受潮，然后接通电源开关，调整仪器波长精度，吸光度精度，再投入使用。

（2）将灵敏度调节旋钮调置“1”挡（放大倍率最小）。

（3）开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长，仪器预热20分钟。

（4）校正“0”和“100%”。打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0%T”旋钮，数字显示为“0.000”；盖上试样室盖，将比色杯架处于蒸馏水或空白液校正位置（即将盛有蒸馏水或空白液的比色杯推入光路），使光电管受光，调节透过率“100%T”旋钮，数字显示为“100.0”。

（5）仪器预热后，连续调整“0”和“100%”，待数字显示稳定后，仪器即可进行测定吸光度A或浓度C。

（6）吸光度A的测量是将选择开关置于“A”（此时盛有蒸馏水或空白液的比色杯已进入光路），???节吸光度调零旋钮，数字显示为“0.000”；将被测样品的比色杯移入光路，显示值即为被测样品的吸光度A值。

（7）浓度C的测量是将选择开关旋至“C”，已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，数字显示为标定值；再将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度C值。

【仪器的维护与调校】

仪器的维护、调校和故障修理应由专业技术人员完成或在专业技术人员的指导下进行。;02;【实验目的】

通过实验训练学生的实践操作技能和培养学生的动手能力，使学生进一步掌握血清蛋白质测定的临床意义。

【实验原理】

蛋白质分子中的酰胺键（-CONH-）在碱性条件下，与Cu2+产生稳定的紫红色络合物。与两分子尿素缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+的反应相似，故称为双缩脲反应。

【试剂与器材】

本实验所用的检测试剂盒可在检验试剂专卖市场上购买。

1.6mol/L氢氧化钠溶液

2.双缩脲试剂

3.蛋白标准液

4.器材

【注意事项】

（1）血清标本以新鲜为宜，在冰箱保存而不浑浊的标本也可应用，含脂类极多的血清加入试剂后仍浑浊不清，可用乙醚3mL抽提后再比色。

（2）蛋白标准液要澄清，如果浑浊应更换，否则需作标准空白管，以消除浊度的影响。

（3）试管、刻度吸管应清洁，否则会有浑浊出现。

（4）明显溶血标本可干扰双缩脲反应，故不宜使用。

（5）黄疸血清可使结果偏高，最好做相应的血清空白，以保证结果准确。

;【临床意义】

1.血清总蛋白浓度增高见于①蛋白质合成增加：如多发性骨髓瘤患者；②总蛋白浓度相对增高：如呕吐、腹泻、高热、休克、慢性肾上腺皮质功能减退（艾迪生病）等。

2.血清总蛋白浓度降低见于①血浆被稀释：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的水、钠潴留；②吸收不足、消耗增加：如长期食物蛋白质含量不足、慢性肠道疾病的吸收不良或消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺功能亢进和恶性肿瘤等；③合成障碍：肝功能严重受损时，血浆蛋白质合成减少，以清蛋白下降最为显著；④蛋白质大量丢失：如严重烧伤、大出血时，大量血浆、血液丢失；肾病综合征时，尿液丢失蛋白质；溃疡性结肠炎粪便中丢失蛋白质，这些病理改变均可使血清总蛋白浓度降低。;03;一、酶作用的特异性;一、酶作用的特异性;二、影响酶活性的因素;二、影响酶活性的因素;04;【实验目的】

了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理和操作技能，能正确地完成实验操作和掌握血糖测定的注意事项及临床意义。

【实验原理】

葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在4-氨基安替比林和酚存在下，经过氧化