TCVMA-猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法.pdf

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团体标准

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猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法

MethodofDropletDigitalPCRforToxoplasmagondiiincat

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

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前  言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规

则起草。

本文件由中国兽医协会提出并归口。

本文件起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院、吉林省农科院、吉林省畜牧总站、吉林省东丰县畜

牧总站。

本文件主要起草人：曹利利、孙兴忠、肖丹、王楠、董航、任科研、苑淑贤、郭衍冰、刘沂霖、

王连波。

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猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法

1范围

本文件规定了猫的弓形虫(ToxoplasmaGondii)微滴式数字PCR检测方法的试剂与耗材、仪器与设

备、样品、操作步骤、结果分析。

本文件适用于猫粪便中弓形虫核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1微滴式数字

微滴式数字PCR（

dropletdigitalPCR）利用微滴化技术将一份反应体系分成数万个纳升级的微

滴进行定量PCR检测，本质上是将传统PCR的一次检测变成数万次检测，提高了核酸序列检测的灵敏

度和精准度。

4试验条件

4.1生物安全要求

所有样品、培养物和废弃物的处置应符合GB19489的规定。

4.2防污染措施

防止污染措施应符合GB/T27401的规定。

5试剂与耗材

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5.1核酸提取试剂

宜选取商品化的粪便DNA提取试剂盒。

5.2微滴式数字PCR扩增试剂与耗材

宜按照不同的微滴式数字PCR平台的说明书选取推荐的微滴式数字PCR扩增试剂与耗材。

5.3引物和探针

上游引物（F）：5’-TCCCCTCTGCTGGCGAAAAGT-3’

下游引物（R）：5’-AGCGTTCGTGGTCAACTATCGATTG-3’

探针（P）：5’-FAM-TCTGTGCAACTTTGGTGT