基因疫苗在肿瘤治疗的研究进展【18页】.pptx

基因疫苗在肿瘤免疫治疗中的研究进展;

肿瘤疫苗来源于自体或异体肿瘤细胞或其粗提取物，带有肿瘤特异性抗原(tumorspecificantigen，TSA)或肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen，TAA)。它可通过激发特异性免疫功能来攻击肿瘤细胞，克服肿瘤产物所引起的免疫抑制状态，增强TAA的免疫原性，提高自身免疫力来消灭肿瘤。TSA的免疫治疗可以启动以肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)反应为主的抗肿瘤效应，有效打击肿瘤，防止转移、复发且不伤及无关组织，其抗肿瘤特异性和免疫记忆性是其他方法所不能比拟的。它既可以独立地治疗肿瘤，又可与手术及放、化疔结合，具有疗效高、特异性强、不良反应小等优点，尤其对于中晚期已经发生转移的恶性肿瘤而言，它具有独到的治疗作用，故在肿瘤综合治疗中占有重要地位。

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根据肿瘤疫苗的具体用途，可分为两种：一种是预防性疫苗，如用与某些特殊肿瘤发生有关的基因制备疫苗，接种于具有遗传易感性的健康人群，进而可以控制肿瘤的发生。另一种是治疗性疫苗，它以肿瘤相关抗原为基础，主要用于化疗后的辅助治疗。根据肿瘤疫苗的来源，又可分为肿瘤细胞疫苗、基因疫苗、树突状细胞疫苗、CTL表位肽疫苗等。;

肿瘤细胞疫苗是从机体肿瘤组织中提取肿瘤细胞，经灭活处理后使瘤细胞丧失致瘤性，但仍保持其免疫原性，然后对机体进行主动免疫。理论上这类疫苗可提供肿瘤抗原，包括TSA和TAA，诱导机体产生抗肿瘤免疫应答。但肿瘤细胞TSA表达低下，并缺乏一些免疫辅助因子的表达，免疫原性较低，常无法有效地诱导抗肿瘤免疫应答。因此，通常采用在疫苗中加入诱导免疫应答的细胞因子，如IL-2、IL-4和GM-CSF等，借此来达到增强疫苗免疫原性的目的，其中以GM-CSF被认为最为有效。在疫苗接种的部位，局部表达的GM-CSF能够增加抗原提呈细胞APC数量，从而有效地捕获、加工和提呈抗原给T细胞。而在肿瘤细胞疫苗中导人协同共刺激分子，能够提供T细胞活化所需的非特异性第二信号，促进免疫应答。;DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是将外源基因导入真核表达载体转染细胞，产生抗原，引发机体的免疫应答反应，达到预防或治疗的目的。

相对于传统的减毒(或灭活)疫苗以及亚单位疫苗而言，DNA疫苗被称为第三代疫苗DNA疫苗既可作为感染性疾病的预防，也可作为肿瘤自身免疫性疾病等的治疗工具。

;瘤基因疫苗的免疫学机制

肿瘤基因疫苗诱导的抗肿瘤免疫反应机理可能是DNA疫苗转染至宿主细胞后，将其编码的抗原蛋白提呈给免疫系统，诱导MHC-I限制性CD8+的CTL和MHC-Ⅱ限制性的TH以及抗体产生，引起广泛的免疫应答。质粒DNA进入组织后，通过胞饮方式被摄人宿主细胞，在细胞内表达产生抗原蛋白，细胞将表达蛋白转运至邻近的APC，然后蛋白被多蛋白酶体系降解成为有不同抗原表位的短肽进入内质网腔内，与MHC-I类分子结合，形成MHC-I肽复合物，递呈给并激活CD8+T细胞，诱导产生细胞免疫反应。辅助性T细胞(HTL)则诱导和维持CTL效应。动物实验证明了抗原特异性的HTL在CTL清除肿瘤过程中所起的重要作用。而另一些短肽则与MHC-Ⅱ结合，形成MHC-Ⅱ肽复合物，提呈给CD4+T细胞使其激活，刺激抗原特异性的B细胞分泌抗体，产生体液免疫。;瘤基因疫苗的构建

;载体的选择

构建DNA疫苗的质粒载体有多种，但多以pUC或pBR322为基本骨架，如pcl、pSV2、pRSV、pcDNA3.0、peDNA3.1、peDNA4.O、VRl320、pBK、pGFP等。质粒载体及其组件，直接影响着外源抗原蛋白的表达量和机体的免疫反应状况。;外源抗原基因的选择和分析

构建DNA疫苗的外源抗原基因可以是单个基因、完整的一组基医、编码抗原决定簇的一段或数段核苷酸序列，可以来自同一病原体的不同基因，也可以来自不同病原体，可以将两个或多个抗原基因构建在同一表达载体上，形成多价或多联DNA疫茁，达到一种疫苗预防多个血清型／基因型或多个病原体的目的。

;外源抗原基因与表达载体的连接及鉴定

外源抗原基因与表达载体的连接，即克隆进入表达载体内时，必须考虑外源基因开放阅读框的完整性、方向、插入位置及表达基因mRNA起始部位的Kataka序列等因素。有研究表明，基因编码的表位疫苗，可以独立发挥作用．也可以被连接成串珠样，即融合的基因也可以被加工和提呈，不同基因间的连接方式以及各基因表达产物间的关系，直接影响着DNA疫苗的免疫效果。鉴定主要有酶切、PcR和测序鉴定。;肿瘤基因疫苗的应用

1.黑色素瘤抗原疫苗

研究表明，黑色素瘤抗原MAGE-3的单表位疫苗能够刺激产生黑色素瘤特异性的CTL，并致使肿瘸消失。黑色素瘤及其转移瘤的抗原表达变异很大，如36％